新型交聯(lián)酶聚體制備、性質及生物催化應用.pdf

1、本文以交聯(lián)酶聚體(CLEAs)為主要研究內容,開發(fā)了兩類CLEAs改進技術。首先以青霉素G?；笧檠芯繉ο?制備得到了青霉素G酰化酶CLEAs,并對其酶學性質進行了研究;針對CLEAs工業(yè)應用中粒徑小,操作穩(wěn)定性差的缺陷,開發(fā)了新型CLEAs微球制備工藝,并將所得微球應用于阿莫西林的酶法合成反應,獲得了較好的催化效果。其次,針對?-甘露聚糖酶CLEAs催化大分子底物傳質效率低的缺陷,開發(fā)了大分子交聯(lián)劑以替代傳統(tǒng)的戊二醛,獲得了具有多孔結

2、構的新型?-甘露聚糖酶CLEAs,提高了其對大分子多糖底物的催化效率。本文主要研究結論如下:
　　青霉素G?；窩LEAs的制備及應用性質研究:以青霉素G酰化酶為研究對象,制備了PGA-CLEAs,其最優(yōu)制備條件:沉淀劑為飽和硫酸銨、沉淀劑與純酶液的體積比為2.3:1、交聯(lián)劑為戊二醛、交聯(lián)劑濃度為0.35％、交聯(lián)時間為2h,最終制得的PGA-CLEAs酶活保留為30.1%。PGA-CLEAs的最適溫度及pH值較游離酶均有所提高。<

3、br>　　青霉素G?；窩LEAs熱失活動力學研究:青霉素G?；附汣LEAs技術固定后,熱失活模型由一步失活變?yōu)槎嗖竭B串失活,且每步失活反應活化能均較游離酶明顯降低,解釋了CLEAs比游離酶熱穩(wěn)定性明顯提高的原因。
　　青霉素G?；窩LEAs微球制備及性質研究:以增大CLEAs粒徑,提高可操作性與穩(wěn)定性為目的,開發(fā)了海藻酸鈣-二氧化硅(ALG-SiO2)包埋CLEAs微球,其最佳制備條件:固化劑氯化鈣濃度15mg/mL、固化時

4、間40min;與海藻酸鈣、殼聚糖、海藻酸鈣-殼聚糖三類微球對比,其形貌規(guī)則、穩(wěn)定性高、重復利用效果好,是制備CLEAs微球的優(yōu)良載體。
　　青霉素G?；窩LEAs微球在阿莫西林合成中的應用:將ALG-SiO2微球應用于阿莫西林合成反應中,確定最優(yōu)反應條件:溫度為25℃,pH為6.5,底物配比HPGM:6-APA=3:1,反應時間為75h,最終得到的阿莫西林收率為55.2%。當該微球重復利用四次后,其收率仍可達到最初收率的85%以