CLA對奶牛乳腺上皮細胞TAG合成及相關基因mRNA轉錄的影響.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid，CLA)是指一組具有位置和幾何異構的十八碳共軛二烯酸的總稱。它廣泛存在于自然界中，在反芻動物的肉制品和乳制品中含量較多。動物和人體試驗已經(jīng)證實CLA具有諸多生理功能，主要包括抗癌、抗動脈粥樣硬化、降低膽固醇、降低體脂、減少脂肪沉積、調(diào)節(jié)骨組織代謝、強化機體免疫和抗糖尿病。
　　 基于CLA的生理功能，營養(yǎng)學家們努力提高乳中CLA含量，但研究發(fā)現(xiàn)，提高乳中CLA含量的同

2、時，卻導致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)。目前研究證實t10，c12-CLA可能是導致奶牛乳脂降低綜合癥(MFD)的主要原因，因此本試驗采用組織塊法體外培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細胞，探索c9，t11-CLA和t10，c12-CLA純品對乳腺細胞內(nèi)乳脂合成及相關基因mRNA轉錄的影響。在分子水平上，探討CLA對奶牛乳腺上皮細胞甘油三酯(TAG)含量及脂肪酸合成相關基因mRNA轉錄的影響。試驗結果表明:
　　 (1)采用組織塊法實現(xiàn)了體外培養(yǎng)

3、出奶牛乳腺上皮細胞，細胞成活率較高，達到85％以上;經(jīng)過多次傳代和角蛋白18鑒定后，可得到純化的奶牛乳腺上皮細胞。測定乳腺上皮細胞的相關生物學性狀，試驗結果為細胞生長曲線呈“S”型，符合一般細胞生長規(guī)律:細胞群體倍增時間為32.18h;細胞接種存活率最高可達87％。
　　 (2)試驗結果表明，c9，t11 CLA和t10，c12 CLA均可顯著降低乳腺上皮細胞內(nèi)TAG含量(P＜0.05)，且t10，c12 CLA對TAG的抑制率

4、高于c9，t11 CLA。
　　 (3)氣相色譜檢測CLA對細胞中脂肪酸組成的影響，結果表明150μmol/L c9，t11 CLA可顯著提高細胞內(nèi)單不飽和脂肪酸(MUFA)的比例（P＜0.05），而50μmol/L c9，t11-CLA顯著增加細胞內(nèi)飽和脂肪酸(SFA)的比例(P＜0.05);細胞內(nèi)MUFA的比例隨著t10，c12 CLA濃度的增加，呈顯著下降趨勢（P＜0.05）;兩種CLA對多不飽和脂肪酸(PUFA)的比例都

5、沒有顯著影響(P＞0.05)。
　　 (4)外源添加不同濃度的c9，t11-CLA與t10，c12-CLA直接作用于乳腺上皮細胞48 h，采用實時熒光定量PCR技術，測定乳腺上皮細胞脂肪酸攝取與轉運及甘油三酯合成相關基因mRNA的轉錄。試驗結果:與對照組相比，50～150μmol/L的c9，t11 CLA和t10，c12 CLA均顯著下調(diào)LPL基因mRNA的轉錄水平（P＜0.05）;50μmol/L c9，t11 CLA顯著下調(diào)

6、CD36基因mRNA的轉錄水平（P＜0.05），150μmol/L c9，t11 CLA上調(diào)它的轉錄水平（P＜0.05），CD36mRNA的轉錄水平隨t10，c12 CLA濃度增加呈顯著上升趨勢（P＜0.05）;150μmol/L c9，t11CLA和不同濃度的t10，c12 CLA均可顯著上調(diào)ACBP基因mRNA的轉錄水平(P＜0.05);相比對照組，c9，t11 CLA與t10，c12 CLA均顯著下調(diào)FABP3基因mRNA的轉錄水