紅發(fā)夫酵母GGPP合成酶過量表達對蝦青素產(chǎn)量的影響.pdf

1、紅發(fā)夫酵母GGPP合成酶過量表達對蝦青素產(chǎn)量的影響TheeffectofastaxanthinyieldbyoVerexpressingGGPPsynthaseinPhaffiayeast_學科專業(yè)：制藥工程研究生：宋熙指導教師：趙學明教授天津大學化工學院二零一零年六月一苓一夸，牛八月r、、V摘要蝦青素是一種類胡蘿卜素，具有極強的淬滅自由基的能力并且還具有極強的著色能力，因此在醫(yī)藥，化妝品，食品及飼料行業(yè)都有廣泛的應用前景。紅發(fā)夫酵母的

2、發(fā)酵生產(chǎn)蝦青素，以培養(yǎng)時間短，不需光照而且可以進行高密度培養(yǎng)等優(yōu)點得到廣泛關注。代謝工程方法改造菌種常用手段為敲除某些旁路的關鍵酶基因以減少碳的代謝分流，或者過表達某些關鍵酶基因。本文以野生型紅法夫酵母As21557作為出發(fā)菌株，確定應該在上游基因編碼的關鍵酶上入手，通過crtE基因的擴增，增加蝦青素的前體物，進而考查其對紅發(fā)夫酵母的生長及蝦青素的產(chǎn)量帶來的影響。crtE基因編碼櫳牛兒基櫳牛兒基焦磷酸合成酶(GGPP)，GGPP是多種初

3、生和次生代謝物的共同前體，為許多二萜、類胡蘿卜素、葉綠素、醌和維生素E側鏈等提供構建骨架。所以GGPP合酶能夠起到調(diào)節(jié)碳流的作用，從而成為初生和次生代謝途徑中的關鍵酶之一。本實驗通過同源重組的方法，構建了兩個轉化載體pSXpc，pSXgc。這兩個載體均以rDNA為同源臂，分別將自帶啟動子的crtE基因，以及替換了強啟動子gpd的crtE基因轉化進紅發(fā)夫酵母，并整合至其基因組上，以G418作為抗性篩選標記，最終篩選出成功擴增crtE基因的