半花菁結構pH熒光探針以及葉酸修飾CMD脂質(zhì)體的研究.pdf

1、小分子熒光探針擁有靈敏度高、響應速度快、檢測簡便、可實時原位檢測等優(yōu)點，在細胞成像等生命研究領域得到了廣泛的應用。本文以小分子熒光探針為切入點，基于分子內(nèi)電荷轉(zhuǎn)移(ICT)機制，構建了一種檢測pH值的比值式熒光探針CyP。該探針以1-乙基-2，3，3-三甲基吲哚碘化物作為ICT熒光骨架，以對羥基苯甲醛作為目標物的識別基團。該探針在DMSO/水混合溶劑中對H+響應具有專一性，探針的熒光發(fā)射峰強度比值(I513 nm/I553 nm)在pH

2、值5.4-7.2范圍具有良好的線性關系，可有效的避開探針濃度、復雜環(huán)境因素等帶來的干擾。另外發(fā)現(xiàn)探針在工作濃度下具有較低細胞毒性，同時探針能夠在短時間內(nèi)被細胞攝取。研究結果表明CyP是一類潛在的可用于檢測分析細胞內(nèi)pH值的熒光探針。
　　脂質(zhì)體作為藥物運輸載體，具有較好的生物相容性、被動靶向、可保護包覆的藥物等優(yōu)點，但同時存在穩(wěn)定性差、無主動靶向性、包封藥物易滲漏等不足。本課題組前期工作表明采用羧甲基葡聚糖(CMD)修飾脂質(zhì)體(C

3、MD-LIPs)，可以使脂質(zhì)體具有較好的穩(wěn)定性，并具有pH敏感釋放藥物性質(zhì)。本文延續(xù)上述工作，將對腫瘤細胞具有特異性靶向作用的葉酸偶聯(lián)到CMD-LIPs表面制備主動靶向脂質(zhì)體，以進一步改善脂質(zhì)體的抗腫瘤性能。首先，以葡聚糖、葉酸等為原料，合成了葉酸修飾兩親性葡聚糖(FA-CMD)，并以此為表面修飾材料，通過薄膜水化超聲法制備了FA修飾脂質(zhì)體(FA-CMD-LIPs)。該脂質(zhì)體的表面電荷約為-18mV，粒徑約200nm，4℃下可儲存30天

4、以上。通過硫酸銨梯度法制備了負載阿霉素(DOX)的FA-CMD-LIPs，包封率達到94％。體外藥物緩釋表明FA-CMD-LIPs對DOX的釋放速率快于CMD-LIPs，且同樣具有pH敏感性。細胞毒性實驗表明，負載阿霉素的FA-CMD-LIPs對HeLa腫瘤細胞的生長抑制作用要高于負載阿霉素的CMD-LIPs。此外，熒光顯微鏡顯示相比于載藥CMD-LIPs，載藥FA-CMD-LIPs體系中細胞攝取的DOX濃度較高，表明FA-CMD-LI