微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)鑒別動(dòng)物源性成份的應(yīng)用研究.pdf

1、商品中動(dòng)物源性成份的摻假、冒充、瞞報(bào)等關(guān)系食品安全事件屢禁不止，損害著消費(fèi)者的權(quán)益，影響著市場(chǎng)秩序。瘋牛病的爆發(fā)，令人們開(kāi)始重新思考飼料中添加動(dòng)物源性成份的可行性。因此，商品中動(dòng)物源性成份的鑒別顯得越來(lái)越重要。現(xiàn)有的動(dòng)物源性的檢測(cè)方法，因操作流程復(fù)雜、技術(shù)落后等，已不能滿(mǎn)足市場(chǎng)發(fā)展的需要。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，微衛(wèi)星DNA已被深入了解，微衛(wèi)星DNA遵循孟德?tīng)栠z傳定律，可以穩(wěn)定遺傳，被廣泛應(yīng)用于群體遺傳研究，但是關(guān)于用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)鑒

2、別肉品的研究還未見(jiàn)報(bào)道。運(yùn)用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)建立一種快速、有效的動(dòng)物源性成份的檢測(cè)方法，確定動(dòng)物成份的物種，能幫助質(zhì)檢人員提高工作效率降低成本，快速的控制動(dòng)物源性商品的隨意流通，擴(kuò)大食品安全控制范圍，滿(mǎn)足市場(chǎng)發(fā)展的檢測(cè)需要。
　　 本試驗(yàn)運(yùn)用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)鑒別商品中常見(jiàn)的動(dòng)物源性成份。采集市場(chǎng)上常見(jiàn)的豬、牛、山羊、綿羊、雞、鴨、鵝為試驗(yàn)對(duì)象，建立組織DNA的快速提取方法，從Genebank中初選出牛、綿羊、鴨、鵝四種動(dòng)物的微衛(wèi)星標(biāo)

3、記，通過(guò)微衛(wèi)星標(biāo)記的側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物，然后進(jìn)行PCR-凝膠電泳，篩選出每種動(dòng)物具有種內(nèi)通用、種間特異性的微衛(wèi)星標(biāo)記用以鑒別。本實(shí)驗(yàn)室前期試驗(yàn)篩選出的豬、山羊、雞的特異性微衛(wèi)星標(biāo)記，對(duì)新增綿羊和鵝源性樣品進(jìn)行檢測(cè)，擴(kuò)大此三種動(dòng)物微衛(wèi)星標(biāo)記的檢測(cè)范圍。對(duì)市售動(dòng)物性制品進(jìn)行了成份的檢測(cè)驗(yàn)證實(shí)際可應(yīng)用性。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明：在豬、牛、山羊、綿羊、雞、鴨、鵝的動(dòng)物源性成份中鑒定豬源性成份采用豬的微衛(wèi)星標(biāo)記EF172428，擴(kuò)增的目的片段

4、為600bp；鑒定牛源性成份首先采用牛的微衛(wèi)星位點(diǎn)AB271461，擴(kuò)增的目的片段327bp，然后采用微衛(wèi)星標(biāo)記MCM164和AF245170，無(wú)擴(kuò)增條帶出現(xiàn)；鑒定山羊源性成份采用山羊的微衛(wèi)星標(biāo)記AF245170，擴(kuò)增的目的片段為679bp；鑒定綿羊源性成份采用綿羊的微衛(wèi)星位點(diǎn)MCM164，擴(kuò)增的目的片段為297bp；鑒定雞源性成份采用雞的微衛(wèi)星標(biāo)記MCW174，擴(kuò)增的目的片段為261bp；鑒定鴨源性成份采用鴨的微衛(wèi)星標(biāo)記AMU70，擴(kuò)

5、增的目的片段為252bp，然后采用微衛(wèi)星標(biāo)記EU833383，無(wú)擴(kuò)增條帶出現(xiàn)；鑒定鵝源性成份采用鵝的微衛(wèi)星標(biāo)記EU833383，擴(kuò)增的目的片段為479bp。
　　 對(duì)市售鴨熟食類(lèi)商品用鴨的微衛(wèi)星標(biāo)記AMU70檢測(cè)，牛肉干類(lèi)商品用牛的微衛(wèi)星標(biāo)記AB271461檢測(cè)，結(jié)果都擴(kuò)增出了目的條帶，說(shuō)明原料經(jīng)過(guò)加工后，未影響微衛(wèi)星方法進(jìn)行動(dòng)物源性成份的檢測(cè)和鑒定。
　　 用微衛(wèi)星標(biāo)記技術(shù)鑒別動(dòng)物源性成份的方法，具有較高的特異性、較好