人臍血樹(shù)突狀細(xì)胞體外培養(yǎng)及免疫功能的研究.pdf

1、目的：通過(guò)人臍血樹(shù)突狀細(xì)胞(Dendriticcells,DC)的體外培養(yǎng)，對(duì)DC進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀(guān)察及免疫表型檢測(cè)，探討其對(duì)抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞CTL活性的影響。 方法：本研究首先在無(wú)菌條件下常規(guī)采集臍血，用淋巴細(xì)胞分離液分離臍血單個(gè)核細(xì)胞(cordbloodmononuclearcell，CMNC)。將獲得的單個(gè)核細(xì)胞(mononuclearcell，MNC)分為7組，每組加入3ml的RPMI-1640培養(yǎng)基，分別添加不同的細(xì)胞因子組合

2、誘導(dǎo)DC的生成。其中一組為對(duì)照組，不加任何細(xì)胞因子培養(yǎng)；另外6組分別添加rhIL-4和rhGM-CSF，其中3組在第五天再分別添加TNF-α。14d后，收集貼壁DC細(xì)胞，分別用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)CD83、CD86、CD14、HLA-DR等免疫表型。用MTT比色法檢測(cè)DC活化的T細(xì)胞與對(duì)照組細(xì)胞(異基因的淋巴細(xì)胞組)對(duì)人紅白血病細(xì)胞系K562細(xì)胞的殺傷作用。 結(jié)果：7組CMNC培養(yǎng)14天后，流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)貼壁細(xì)胞中第六實(shí)驗(yàn)組(10

3、00u/ml的rhIL-4和1000u/ml的rhGM-CSF，培養(yǎng)5天后加入TNF-α50u/ml)的HLA-DR，CD14，CD83和CD86高表達(dá)，與其他組相比較P＜0.05，CMNC誘導(dǎo)培養(yǎng)生成DC細(xì)胞的含量為，6組＞5組＞4組＞3組＞2組＞1組＞7組。應(yīng)用MTT比色法測(cè)定從臍血誘導(dǎo)分化的DC活化的CTL細(xì)胞能特異殺傷K562腫瘤細(xì)胞，殺傷作用遠(yuǎn)大于對(duì)照組(p＜0.05)，在效靶比為10∶1時(shí)殺傷作用最大(p＜0.01)，MTT