異鉤藤堿的抗血小板聚集作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、[目的]本工作分別以體內(nèi)、體外模型觀測(cè)異鉤藤堿(isorhynchophylline，Isorhy)對(duì)血栓形成、血小板聚集、血小板鈣離子濃度及cAMP、TXB2、6-keto-PGF1α的影響，并對(duì)其作用及作用機(jī)制進(jìn)行研究，為Isorhy的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。 [方法]1.通過(guò)給小鼠腹腔注射Isorhy后，經(jīng)小鼠尾靜脈注射膠原蛋白與腎上腺素的混合誘導(dǎo)劑，誘發(fā)小鼠血栓性偏癱和死亡。觀察注射混合誘導(dǎo)劑后5min內(nèi)小鼠死亡數(shù)或15m

2、in內(nèi)偏癱未恢復(fù)的小鼠數(shù)，并取心、肺標(biāo)本做病理學(xué)檢查。2.采用動(dòng)-靜脈旁路血栓形成法制作大鼠血栓模型觀察Isorhy對(duì)其的影響。3.以Born比濁法測(cè)定Isorhy對(duì)二磷酸腺苷(ADP)和凝血酶(Thr)誘發(fā)的大鼠血小板聚集的影響。4.用雙波長(zhǎng)熒光法測(cè)定鈣熒光指示劑Fura-2/AM負(fù)載的由ADP和Thr誘導(dǎo)的家兔血小板血漿游離鈣濃度([Ca2+]i)，觀察Isorhy對(duì)其的影響。5.用125Ⅰ放射免疫法分別測(cè)定Isorhy對(duì)AA誘導(dǎo)的

3、家兔血小板血漿中血栓烷B2(TXB2)生成、ADP誘導(dǎo)的家兔血小板內(nèi)cAMP生成及家兔血小板血漿中6-keto-PGF1α生成的影響。 [結(jié)果]1.腹腔注射Isorhy50mg～100mg/kg的小鼠死亡率均低于血栓組(P＜0.01);形態(tài)學(xué)觀察高、中劑量組的血栓形成情況較血栓組明顯減輕。2.靜脈注射Isorhy5～10mg/kg可明顯降低大鼠血栓濕重(P＜0.01)。3.靜脈注射Isorhy2.5～10mg/kg對(duì)ADP(終濃

4、度1.5×10-5mol·L-1)和Thr(終濃度3U·ml-1)誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集均有明顯抑制作用(P＜0.01)，并呈劑量依賴性，且其對(duì)ADP誘導(dǎo)血小板聚集的抑制作用強(qiáng)于Rhy(P＜0.01)。4.Isorhy0.65mmol·L-1和1.30mmol·L-1對(duì)ADP(1.5×10-5mol·L-1)和Thr(3U·L-1)誘導(dǎo)的大鼠血小板體外聚集有抑制作用(P＜0.01)，IC50分別為1.60mmol·L-1和1.14mmol

5、·L-1;其作用強(qiáng)度弱于Rhy(IC50分別為0.41mmol·L-1，0.80mmol·L-1)(P＜0.01)，但較ASA強(qiáng)(IC50分別為4.31mmol·L-1，2.58mmol·L-1)。5.Isorhy0.65～1.30mmol·L-1明顯抑制ADP和Thr誘導(dǎo)的家兔血小板胞漿鈣離子濃度的升高(P＜0.01)，IC50分別為2.24mmol·L-1和1.45mmol·L-1，但其對(duì)Thr誘導(dǎo)鈣離子濃度升高的抑制作用不如Rhy

6、明顯(P＜0.01)。6.Isorhy0.33～1.30mmol·L-1促使AA(300μmol·L-1)誘導(dǎo)的血小板血漿中TXB2的生成；Isorhy1.30mmol·L-1對(duì)血小板血漿中6-keto-PGF1α的生成有抑制作用(P＜0.01)，0.33～0.65mmo1·L-1對(duì)6-keto-PGF1α的含量無(wú)明顯影響(P＞0.05);Isorhy0.33～1.30mmol·L-1可升高受ADP作用后的血小板內(nèi)cAMP的濃度(P＜0