弓形蟲信號轉導蛋白14-3-3和主要膜表面抗原SAG1基因的克隆、表達及免疫學診斷.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:體外擴增弓形蟲RH株信號轉導蛋白14-3-3(Toxo14-3-3)和膜表面主要抗原SAG1編碼基因,克隆至原核表達載體pET28a,并表達出Toxo14-3-3和SAG1重組蛋白.利用此重組蛋白,探討rToxo14-3-3和rSAG1用于診斷弓形蟲感染的價值.方法:收集、純化弓形蟲RH株速殖子,提取總RNA,逆轉錄生成cDNA,然后以其為模板擴增出Toxo14-3-3、SAG1編碼基因,將擴增產(chǎn)物克隆入原核表達載體pET28a.

2、在原核細胞表達Toxo14-3-3、SAG1重組蛋白.重組子雙酶切、PCR和測序鑒定,轉化大腸桿菌BL21,并以IPTG誘導表達.制備、純化rToxo-14-3-3和rSAG1蛋白抗原,利用純化的rToxo-14-3-3和rSAG1抗原,間接ELISA法探討其診斷弓形蟲病的價值.結論:成功地從弓形蟲RH株基因組DNA中獲取了14-3-3基因和SAG1基因,構建了pET28a/Toxo14-3-3和pET28a/SAG1重組質(zhì)粒,并獲得了

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