活血開(kāi)竅湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷NO含量及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 腦血管病是嚴(yán)重威脅人類(lèi)尤其是中老年人健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病，具有高發(fā)病率、高致殘率和高致死率的特點(diǎn)，其中70-80％是缺血性腦血管病。腦缺血再灌注損傷是缺血性腦梗死區(qū)在血液供應(yīng)恢復(fù)后出現(xiàn)的更嚴(yán)重的腦損傷，其損傷發(fā)生機(jī)制比較復(fù)雜，抑制再灌注損傷是治療缺血性腦血管病的重要環(huán)節(jié)。盡管?chē)?guó)內(nèi)外研究者對(duì)此進(jìn)行了大量的研究并取得一定進(jìn)展，但仍缺乏有針對(duì)性的治療策略中藥治療缺血性腦血管病已有悠久的歷史，具有療效確切、不良反應(yīng)少

2、、藥理作用廣泛等優(yōu)點(diǎn)，可以從多個(gè)層次和多個(gè)環(huán)節(jié)上起到保護(hù)作用，特別適合腦缺血所致的多種病理改變，日益引起醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。
　　 活血開(kāi)竅湯是導(dǎo)師李平教授治療缺血性腦卒中的經(jīng)驗(yàn)方，該方由天麻、牛膝、寄生、遠(yuǎn)志、葛根、川芎、地龍、丹參、赤芍組成，具有活血開(kāi)竅、補(bǔ)腎通絡(luò)的功效。多年來(lái)的臨床實(shí)踐證明，此方在治療缺血性腦卒中方面確有療效。本實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)觀(guān)察缺血再灌注大鼠腦組織中NO含量和神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)的變化，探討活血開(kāi)竅湯對(duì)大鼠腦缺血再灌注

3、損傷保護(hù)作用的機(jī)制，進(jìn)一步為臨床用藥提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，以便推廣應(yīng)用。
　　 方法：
　　 本課題采用Wistar雄性成年大鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，研究活血開(kāi)竅湯對(duì)局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)機(jī)制。將大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組、活血開(kāi)竅湯治療組。各組在相同條件下分籠喂養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始第一天起給予治療組活血開(kāi)竅湯2.2g/100mg/d灌胃，假手術(shù)組和模型組分別給予等量的生理鹽水灌胃，各組每天灌胃1次，連續(xù)灌胃給藥5天。

4、至造模成功后繼續(xù)重復(fù)手術(shù)前的給藥方式致指定時(shí)間點(diǎn)。末次灌胃給藥后2h根據(jù)改良的Zea-Longa線(xiàn)栓法制作大腦中動(dòng)脈栓塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)模型，90min后實(shí)施再灌注。分別于再灌注后24h、48h快速將大鼠斷頭處死，完整剝?nèi)〈竽X組織，其中每組的半數(shù)制成腦組織勻漿液用于NO檢測(cè)，另半數(shù)采用心臟灌注的方法固定大腦，用于染色以觀(guān)察細(xì)胞凋亡和病理變化。將腦組織勻漿液標(biāo)本采用硝酸還原酶法

5、測(cè)定NO含量，嚴(yán)格按試劑盒操作步驟完成。將用多聚甲醛固定的腦組織標(biāo)本采用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口術(shù)端標(biāo)記(TUNEL)染色法檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)。高倍鏡下觀(guān)察，細(xì)胞核內(nèi)棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞，分別選擇5個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)TUNEL陽(yáng)性標(biāo)記細(xì)胞，計(jì)算平均每個(gè)高倍視野下100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。運(yùn)用HE染色方法觀(guān)察活血開(kāi)竅湯對(duì)腦缺血損傷的組織形態(tài)學(xué)改變。
　　 結(jié)果:
　　 經(jīng)實(shí)驗(yàn)觀(guān)察，活血開(kāi)竅湯治療組大鼠缺血再灌注24h、

6、48h后，病理顯示模型組大鼠的腦組織神經(jīng)細(xì)胞損傷數(shù)目較多，且損傷嚴(yán)重，而治療組顯示神經(jīng)細(xì)胞損傷程度明顯較輕。經(jīng)測(cè)定，模型組大鼠腦組織中NO的含量及神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)明顯升高(P＜0.01)，活血開(kāi)竅湯治療組NO的含量較模型組明顯下降(P＜0.05)，細(xì)胞凋亡數(shù)較模型組也顯著減少(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 活血開(kāi)竅湯能改善缺血再灌注大鼠的神經(jīng)功能，可通過(guò)減少腦組織中NO的含量減輕其對(duì)腦組織的損害，實(shí)驗(yàn)結(jié)果亦表明，活