缺氧誘導(dǎo)因子-1α和血管內(nèi)皮生長因子在退變椎間盤中的表達及意義.pdf

1、前言: 椎間盤退變是椎間盤突出的病理基礎(chǔ)，已有大量研究證實了細(xì)胞因子在椎間盤退變中起重要作用。最近有研究證實突出人類腰椎間盤中有HIF-1α的表達，認(rèn)為HIF-1α在人類椎間盤細(xì)胞的生存和突出間盤重吸收方面可能起著至關(guān)重要的作用。HIF-1α是機體細(xì)胞適應(yīng)低氧的重要轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，組織處于缺氧狀態(tài)時HIF-1α發(fā)揮轉(zhuǎn)錄和基因調(diào)控作用，是缺氧狀態(tài)下血管生成的核心調(diào)控因子，通過上調(diào)VEGF的表達并影響其他因子的表達，而直接參與血管生成

2、。為了進一步弄清這一機制在椎間盤退變中是否存在及其作用，采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測椎間盤組織中HIF-1α、VEGF的表達，以探討二者與椎間盤退變的關(guān)系。 實驗材料和方法: 一、主要試劑及儀器試劑：HIF-1α多克隆抗體、VEGF多克隆抗體、鏈霉親和素-過氧化物酶復(fù)合物法(SABC)免疫組化即用型試劑盒及DAB(二氨基聯(lián)苯胺)顯色液(均購自武漢博士德生物工程有限公司)；二甲苯；各濃度梯度酒精。 儀器： Leitz1

3、512型切片機(Leitz，German)；BX60F/PM30-3型顯微照相系統(tǒng)(Olympus，Japan)；Metamorph(NIC，U.S.A)/DP10/BX51(Olympus，Japan)彩色病理圖文分析系統(tǒng)；電子天平；微量移液器。 二、實驗取材及實驗分組 實驗一：選擇因頸椎間盤突出癥而行前路手術(shù)切除的椎間盤組織標(biāo)本40例，其中纖維環(huán)破裂組20例，纖維環(huán)完整組20例。同時選擇20例頸椎骨折行前路減壓內(nèi)固定

4、術(shù)患者的頸椎間盤組織標(biāo)本作為對照組。每個椎間盤在解剖顯微鏡下分離出纖維環(huán)、髓核和軟骨終板組織。 實驗二：選擇因腰椎間盤突出癥而行后路手術(shù)切除的椎間盤組織標(biāo)本，其中纖維環(huán)破裂組20例；纖維環(huán)完整組20例。同時選擇20例腰椎骨折行椎管減壓內(nèi)固定術(shù)患者的椎間盤組織標(biāo)本作為對照組。每個椎間盤在解剖顯微鏡下分離出纖維環(huán)和髓核。 三、實驗方法、檢測指標(biāo)及染色結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn) (一)實驗方法、檢測指標(biāo)： 1、HE染色進行

5、形態(tài)學(xué)觀察。 2、免疫組織化學(xué)法(SABC法)檢測HIF-1α、VEGF的表達情況。 3、免疫反應(yīng)切片在BX60F/PM30-3型顯微照相系統(tǒng)(Olympus，，Japan)下觀察并攝像。 4、圖片應(yīng)用Metamorph(NIC，U.S.A.)/DP10/BX51(Olympus，Japan)彩色病理圖文分析系統(tǒng)進行免疫反應(yīng)產(chǎn)物顯微圖像分析，得出平均光密度值和積分平均光密度值。 (二)染色結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)本

6、實驗用DAB顯色，HIF-1a的陽性表達為胞核和胞漿內(nèi)棕黃色顆粒，主要位于胞漿。VEGF的陽性表達為胞漿內(nèi)的棕黃色顆粒。 四、數(shù)據(jù)分析 實驗一、采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)：采用單因素方差分析法中LSD及DUNNETT檢驗分析總體差異及各組間差異。 實驗二、采用spss11.5統(tǒng)計軟件進行分析，統(tǒng)計方法采用方差分析，各組間兩兩比較采用LSD法，計算Pearson相關(guān)系數(shù)分析相關(guān)性。 實驗結(jié)果:

7、 實驗一、退變頸椎間盤組織中有缺氧誘導(dǎo)因子-1α高表達，尤其在髓核細(xì)胞更為顯著，HIF-1α的表達在纖維環(huán)破裂組顯著高于纖維環(huán)完整組。 實驗二、退變腰椎間盤組織中HIF-1α和VEGF呈高表達，HIF-1α和VEGF在髓核的表達顯著高于纖維環(huán)；纖維環(huán)破裂型顯著高于纖維環(huán)完整型；各組中HIF-1α和VEGF的表達均高度相關(guān)。 結(jié)論: 1、退變頸椎間盤組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達與突出類型相關(guān)，缺氧誘導(dǎo)因子-