乙酰肝素酶對口腔黏膜惡性黑色素瘤生物學(xué)行為的影響.pdf

1、背景：
　　 口腔黏膜惡性黑色素瘤是一種少見的惡性程度極高的腫瘤，預(yù)后較差，患者主要死亡原因為局部侵襲及遠處轉(zhuǎn)移。與皮膚惡性黑色素瘤相比，口腔黏膜惡性黑色素瘤好發(fā)種族不同，惡性程度更高，有著不同的病因和發(fā)病機制，目前針對口腔黏膜惡性黑色素瘤的研究很少。局部侵襲及遠處轉(zhuǎn)移是口腔黏膜惡性黑色素瘤重要的預(yù)后指標，因而闡明口腔黏膜惡性黑色素瘤局部侵襲及遠處轉(zhuǎn)移的機制將有助于口腔黏膜惡性黑色素瘤患者的診斷和治療。
　　 乙酰肝素酶

2、(heparanase，HPA)是一種能降解細胞外基質(zhì)(extracellularmatrix，ECM)和基底膜(basement membrane，BM)中多糖的酶，在腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。頭頸部惡性腫瘤細胞要實現(xiàn)侵襲和轉(zhuǎn)移，必須穿過ECM及BM進入循環(huán)，在這個過程中ECM各種成分的降解是必不可少的。最近有研究顯示在胰腺癌、舌癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、胃癌及前列腺癌等多種人類腫瘤中均發(fā)現(xiàn)了HPA的存在，并均與癌細胞的浸潤和轉(zhuǎn)移有關(guān)。乙酰

3、肝素酶對口腔黏膜惡性黑色素瘤生物學(xué)行為的影響，目前國內(nèi)外很少有報道。對乙酰肝素酶基因進行干擾使腫瘤細胞生物學(xué)行為發(fā)生改變，并進一步在體內(nèi)外研究乙酰肝素酶靶向抑制劑抗腫瘤的效果，可以為腫瘤的治療提供新的靶點。
　　 目的：
　　 觀察乙酰肝素酶對口腔黏膜惡性黑色素瘤生物學(xué)行為的影響，為口腔黏膜惡性黑色素瘤臨床分子靶向治療提供基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1、回顧分析1998年1月至2005年3月在上海九院就診

4、的61例口腔黏膜惡性黑色素瘤患者，采用病例回顧及生存率分析的方法研究影響口腔黏膜惡性黑色素瘤患者預(yù)后的相關(guān)因素。
　　 2、運用RT-PCR及Western blot技術(shù)觀察口腔黏膜惡性黑色素瘤細胞系(ME細胞系)HPA的表達；采用免疫組化技術(shù)檢測口腔黏膜惡性黑色素瘤石蠟標本HPA的表達，并分析其與患者臨床病理特征以及生存率等預(yù)后指標的相關(guān)性。
　　 3、采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和RNA干擾技術(shù)，建立穩(wěn)定的高表達及低表達HPA的ME

5、細胞。高表達HPA的ME細胞株命名為ME-hpa，低表達HPA的皿細胞命名為ME-shRNA。觀察高表達及低表達HPA對ME細胞的增殖、侵襲、以及體內(nèi)成瘤等生物學(xué)特性的影響。在體外，用MTT法觀察ME，ME-hpa和ME-shRNA細胞的增殖能力，用Transwell遷移實驗觀察ME，ME-hpa和ME-shRNk細胞的侵襲能力。在體內(nèi)，用裸鼠皮下注射成瘤的方法觀察ME，ME-hpa和ME-shRNA細胞的成瘤能力，及體內(nèi)轉(zhuǎn)移侵襲能力。

6、
　　 4、觀察乙酰肝素酶抑制劑JG3對ME細胞裸小鼠皮下移植瘤的生長抑制作用。
　　 結(jié)果：
　　 1、口腔黏膜惡性黑色素瘤預(yù)后差，2年及5年總體生存率為分別為51.1％和30.3％?；颊叩闹饕劳鲈蚴蔷植繌?fù)發(fā)及遠處轉(zhuǎn)移。與患者預(yù)后有統(tǒng)計學(xué)意義的相關(guān)因素為腫瘤大小及AJCC分期。目前的各種單一治療手段之間的差異未顯示與患者的預(yù)后有相關(guān)的統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 2、HPA在口腔黏膜惡性黑色素瘤臨床樣本及細胞

7、系ME細胞中有較高表達，在影響OMM患者的總體生存率的多因素分析中，AJCC分期和HPA表達強度2個因素具有統(tǒng)計學(xué)意義，它們可能是影響患者總體生存率的獨立危險因素。
　　 3、運用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和RNA干擾技術(shù)可以有效增加及降低HPA在口腔黏膜惡性黑色素瘤細胞ME細胞系中的表達，并建立穩(wěn)定的高表達及低表達的細胞系。HPA表達升高在體外未明顯促進口腔黏膜惡性黑色素瘤的增殖、但可增強其遷移能力、提高體內(nèi)成瘤能力。HPA表達降低可抑制惡性黑

8、色素瘤的增殖、減弱其遷移能力、降低體內(nèi)成瘤能力。
　　 4、乙酰肝素酶靶向抑制劑JG3使ME細胞裸小鼠皮下移植瘤的生長減慢。
　　 結(jié)論：
　　 1、HPA在口腔黏膜惡性黑色素瘤中有表達，HPA在口腔黏膜惡性黑色素瘤細胞系(ME細胞)高表達。HPA的表達與口腔黏膜惡性黑色素瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)。
　　 2、應(yīng)用RNA干擾技術(shù)降低HPA的表達，可抑制口腔黏膜惡性黑色素瘤的增殖、降低其遷移能力、降低體內(nèi)成瘤能力