TLR2-3-4-9與HBX在原發(fā)性肝癌中的表達研究.pdf

1、目的：通過檢測肝癌、相對應的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細胞表面的TLR2、TLR3、TLR4、TLR9、HBx的表達差異情況，進一步研究TLRs在肝細胞癌上的表達特性，初步探討Toll樣受體2、3、4、9、HBx對肝炎及乙肝相關的原發(fā)性肝癌發(fā)生、發(fā)展機制的影響，揭示TLR2、3、4、9、HBx表達調控狀況與肝炎及乙肝相關的原發(fā)性肝癌之間的關系，為進一步進行相關的機制研究奠定實驗基礎。
　　方法：1.直接免疫熒光流式細胞術(FCM)檢

2、測細胞表面Toll樣受體2、3、4、9的表達。收集40例新鮮肝癌、配對的癌旁組織以及8例肝血管瘤肝組織標本，進行細胞消化后經FITC標記的TLR2、PE標記的TLR3、4、9抗體標記，采用直接免疫熒光流式細胞術(FCM)檢測新鮮肝癌、相對應的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細胞表面Toll樣受體2、3、4、9表達的平均熒光強度(MFI)及陽性細胞率；利用CellQuest軟件進行參數獲取和資料分析；統(tǒng)計學分析均采用SPSS17.0完成。

3、　　2.免疫組化染色法檢測臨床肝細胞癌組織標本Toll樣受體2、3、4、9、HBx的染色程度。收集110例肝癌包埋石蠟組織及配對的癌旁組織、10例肝血管瘤包埋石蠟組織，對120例石蠟塊切片后進行免疫組化染色方法檢測肝癌和癌旁組織、肝血管瘤肝組織中Toll樣受體2、3、4、9、HBx的表達，利用Image-ProPlus6.0軟件進行組化圖像分析。統(tǒng)計學分析均采用SPSS17.0完成。
　　結果：1.直接免疫熒光流式細胞術(FCM)

4、檢測Toll樣受體2、3、4、9的表達結果顯示：肝癌組織及相對應的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織中所消化的肝細胞和淋巴細胞TLR2、TLR3、TLR4、TLR9的表達的平均熒光強度(MFI)及陽性細胞率水平略有所不同，總體上來說TLR2、TLR4在肝癌組織的表達顯著低于相對應的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織，TLR3、TLR9在肝癌組織的表達則高于相對應的癌旁組織以及肝血管瘤肝組織的表達。
　　2．免疫組化染色法檢測Toll樣受體2、3、

5、4、9、HBx的表達結果顯示：肝癌、相對應的癌旁組織及肝血管瘤肝組織細胞染色觀察顯示，TLR2表達位于細胞漿內，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達率分別為6.4％、7.2%、2%，均為弱表達（p<0.05）；TLR3表達位于細胞核漿內，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達率分別為為74%、63%、40%，癌組織內表達量高于癌旁組織，肝血管瘤肝組織相對弱表達（p<0.05）；TLR4表達位于細胞漿內，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達率分別為22%、8

6、8%、70%,癌中的表達明顯低于癌旁組織中的表達（p<0.05）；TLR9表達位于細胞漿和核內，癌、癌旁、肝血管瘤肝組織的表達率分別為78%、73%、60%，癌細胞中的表達高于癌旁組織中的表達（p<0.05）；
　　3．Toll樣受體2、3、4、9、HBx的表達與肝癌臨床病理學特征比較結果：表達可能與分化程度有關，(x2=7.031P<0.05)，而表達陽性率與年齡、性別、淋巴結轉移均無明顯相關性(P>0.05)。
　　結論

7、：本課題實驗研究表明1.TLR2、4、HBx的表達低于與癌旁非癌組織，這可能提示在HBV感染的肝臟組織中TLR2、4在肝癌中下調了機體對HBV感染的肝癌細胞的免疫監(jiān)視作用，從而逃避抗病毒途徑，在HBV誘導的肝癌肝臟炎癥損傷中存在免疫逃避作用。2.TLR3、9癌組織的表達高于癌旁非癌組織中的表達。這表明有可能提示在HBV感染的肝臟組織中TLR3、9在肝癌中未能限制病毒的復制對有肝損傷作用，在肝癌的發(fā)生與發(fā)展中起到一定的促進作用。3.TLR