半枝蓮黃酮類化合物抑制腫瘤細胞轉移與基底膜黏附的實驗研究.pdf

1、多種腫瘤的生長、轉移、復發(fā)和預后均與腫瘤血管生成密切相關，這個復雜的多步驟過程中包括黏附、基質降解與移動，抑制其中任何一個過程理論上均可抑制腫瘤的侵襲轉移。因此，以腫瘤血管生成為靶點，開發(fā)血管生成抑制劑在抗腫瘤研究中是一個新的十分活躍的研究領域。目前大約發(fā)現(xiàn)了300多種具有血管生成抑制活性的化合物其中超過30個進入臨床Ⅰ到Ⅲ期研究，但是目前臨床試驗的結果表明很多藥物在抑制血管生成的同時帶來了不可抵抗的毒副作用，因此人們逐漸將目光轉向了天

2、然藥物的研究。祖國醫(yī)學中中藥具有取材簡便，毒副作用少的特點，因此以天然藥物為研究對象，來探討和研究新型的抗腫瘤藥物已逐漸成為當今熱點。本試驗旨在研究并證明傳統(tǒng)中藥半枝蓮活性成分的抗腫瘤活性，繼之課題組的前期研究結果，從血管內皮生長因子、基質金屬蛋白酶-2以及整合素αγβ 3等角度探討半枝蓮活性成分的抗腫瘤作用機制，為進一步開發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物奠定理論基礎。 我們采用系統(tǒng)溶劑分離法、硅膠柱層析法等方法，獲得半枝蓮不同極性的提取

3、物以MTT比色試驗及流式細胞術等技術為手段，從中篩選出抑制內皮細胞及腫瘤細胞增殖作用最強的成分。采用免疫熒光術、ELISA等方法，進一步研究其抑制腫瘤生長、侵襲和轉移的作用及其機理。 實驗結果如下： 1.半枝蓮黃酮類化合物的提取與分離：硅膠柱層析法以氯仿．甲醇混合溶劑梯度洗脫(10:0； 100:1； 100:4；100:8；100:20；100:50；0:1)，收集洗脫液，由硅膠薄層(TLC)檢識，合并相同流份，共得7

4、個極性部位(A、B、C、D、E、F、G)。 2.半枝蓮抑制內皮細胞及腫瘤細胞增殖有效成分的篩選：各部位經(jīng)MTT法檢測活性，最后得活性強的部位?；钚宰顝姷陌胫ι忺S酮類化合物不同濃度(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)與空白對照組比較能有效抑制ECV-304細胞系、SGC-790l細胞系以及B16-BL6細胞系的增殖。 3.半枝蓮黃酮類化合物能誘導胃癌細胞的凋亡：取30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml、24

5、0μg/ml四個濃度梯度，隨濃度增加細胞凋亡率也增加，但30μg/ml組與空白組比較沒有顯著差異，當濃度達到120μg/ml時，胃癌細胞凋亡增加，與空白對照組比較有顯著差異(P<0.01)。 4.半枝蓮黃酮類化合物能抑制：ECV-304細胞系和B16BL6細胞系對基底膜黏附能力：作用B16BL6細胞60min后高劑量組(40μg/ml)與對照組之間統(tǒng)計有顯著差異(p<0.01)，作用120min后中高劑量組(20μg/ml、40

6、μg/ml)與對照組比較有顯著統(tǒng)計學差異(p<0.01)，各劑量組從低到高其粘附率呈遞減趨勢；作用后的ECV-304對基底膜的黏附率在60min與對照組比較無差異，作用120min后濃度達到40μg/ml時其對基底膜的黏附率與對照組比較有差異(P<0.01)。 5.半枝蓮黃酮類化合物能抑制ECV-304細胞系與B16-BL6細胞系之間黏附能力：半枝蓮黃酮類化合物作用120min后B16-BL6細胞系對內皮細胞的黏附能力顯著下降，

7、與空白組比較有顯著差異(P<0.01)。 6.半枝蓮黃酮類化合物能抑制SGC-7901細胞VEGF、MMP-2的表達：同一時間段與空白對照組相比，半枝蓮黃酮類化合物各濃度作用細胞24、48h后均能明顯抑制腫瘤細胞的VEGF表達，具有顯著差異(p<0.01)。半枝蓮黃酮類化合物作用細胞48h后中、高濃度組(40gg/ml、80μg/ml)能抑制腫瘤細胞MMP-2的表達，與對照組比較有顯著差異(p<0.01)。同一濃度體系，24h與

8、48h相比在中、高濃度時對VEGF表達影響具有差異性(P<0.01)，高濃度時對MMP-2表達影響具有差異性(P<0.01)，其他濃度相比沒有顯著差異。 結論：半枝蓮黃酮類化合物C在體外具有抑制VEGF及MMP-2表達的作用，并抑制內皮細胞和腫瘤細胞對基底膜的黏附能力，其機理可能通過抑制腫瘤細胞黏附分子和其他促血管生成相關因子的表達，誘導腫瘤細胞及內皮細胞凋亡、抑制內皮細胞及腫瘤細胞的增殖從而阻斷腫瘤血管生成，抑制腫瘤的遠處轉移