GDF-15對Treg細胞分化和功能的影響.pdf

1、目的:近年來,有研究表明GDF-15可以誘導外周單個核細胞(PBMC)中Foxp3轉(zhuǎn)錄水平的的增加,Foxp3是調(diào)節(jié)性T細胞(Tregs)的標志性分子,那么GDF-15對Tregs分化發(fā)育及功能有何影響呢?因此本研究擬探討GDF-15在體外誘導人Na?veCD4+T細胞向Tregs分化過程中的作用及其影響;通過臨床樣本觀察結(jié)直腸癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞比例和血清中GDF-15表達水平的相關性;初步探討GDF

2、-15在iTregs分化中的分子作用機制。
　　方法:本課題設計了以下三個方面實驗:1、GDF-15誘導iTregs分化及其功能的鑒定。通過采取免疫磁珠法分選NaveCD4+T細胞,經(jīng)GDF-15刺激后,通過Real-timePCR、流式細胞術(shù)檢測標志性分子Foxp3、CD25,GITR,CD103等的表達,通過Real-timePCR、ELISA檢測抑制性細胞因子IL-10和TGF-β等的分泌從而鑒定GDF-15誘導的iTreg

3、s表型,進一步用BrdU摻入和CFSE檢測誘導的iTregs對效應CD4+T細胞增殖的影響,同時收集培養(yǎng)細胞上清用ELISA檢測誘導的iTregs分泌的功能相關細胞因子IL-10和TGF-β等。2、收集臨床標本,流式細胞術(shù)檢測外周CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞比例以及ELISA檢測血清中GDF-15濃度,進而分析兩者相關性;3、GDF-15在iTregs分化中的分子作用機制研究。利用激光共聚焦實驗觀察GDF-15在NaveC

4、D4+T細胞膜表面的表達情況,進一步用TGF-β受體阻斷劑阻斷后,Real-timePCR檢測相關基因的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:第一部分GDF-15誘導iTregs分化及其功能的鑒定的實驗結(jié)果顯示GDF-15能誘導NaveCD4+T細胞向iTregs表型分化,且在GDF-15濃度為10ng/mL誘導5天時Foxp3的表達量最高,Real-timePCR和流式細胞術(shù)顯示iTregs的相關功能分子如Foxp3、CD25、GITR和CD1

5、03均表達升高。在進行相關功能檢測中,Real-timePCR和ELISA實驗顯示iTregs可以分泌功能相關的抑制性細胞因子IL-10和TGF-β,BrdU摻入和CFSE實驗結(jié)果進一步證實誘導的iTregs具有抑制效應CD4+T細胞增殖的作用。第二部分臨床實驗通過SPSS13.0分析表明結(jié)直腸癌患者外周CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細胞與血清中GDF-15表達水平兩者之間具有良好的相關性,相關系數(shù)達到0.7909。第三部分GD

6、F-15在iTregs分化中的分子作用機制的實驗中,通過激光共聚焦檢測發(fā)現(xiàn),GDF-15在NaveCD4+T細胞膜表面存在定位現(xiàn)象,Real-timePCR結(jié)果顯示TGF-β受體阻斷劑SB431542可以抑制GDF-15誘導NaveCD4+T分化過程中Foxp3的表達。
　　結(jié)論:GDF-15可以在體外誘導NaveCD4+T細胞向調(diào)節(jié)性T細胞方向分化,同時表現(xiàn)出天然調(diào)節(jié)性T細胞的表型和抑制功能;臨床上結(jié)直腸癌患者外周CD4+CD2