硒對(duì)高同型半胱氨酸血癥誘導(dǎo)的自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈損傷的影響.pdf

1、目的及意義：
　　高同型半胱氨酸血癥是動(dòng)脈硬化性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。臨床研究證實(shí)，當(dāng)高同型半胱氨酸血癥合并高血壓時(shí)可使心腦血管疾病風(fēng)險(xiǎn)驟然上升。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也觀察到，給予SHR大鼠及正常血壓大鼠高蛋氨酸飲食后，SHR大鼠主動(dòng)脈損傷較正常血壓大鼠嚴(yán)重。氧化應(yīng)激被認(rèn)為是高同型半胱氨酸血癥相關(guān)病理改變的主要生化機(jī)制，但同型半胱氨酸在高血壓機(jī)體內(nèi)導(dǎo)致氧化應(yīng)激的具體機(jī)制并不明確。硒是人體內(nèi)一種重要的微量元素，其生物學(xué)作用主要表現(xiàn)在體內(nèi)含硒蛋白酶

2、的功能。GPX-1是體內(nèi)含硒蛋白酶的一種，其在體內(nèi)的作用主要是抗氧化，維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原平衡。本實(shí)驗(yàn)旨在初步探討高同型半胱氨酸血癥致SHR大鼠主動(dòng)脈損傷的可能機(jī)制以及觀察不同硒水平對(duì)高同型半胱氨酸所致的SHR大鼠主動(dòng)脈損傷的影響。
　　方法：
　　30只6周齡雄性自發(fā)性高血壓大鼠隨機(jī)分為6組，每組5只：①普通組（Nor組）：正常硒含量飼料喂養(yǎng)14周+4天；②低硒組（低Se組）：低硒飼料喂養(yǎng)14周+4天；③低硒+高同型半胱氨酸

3、組（低Se+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，最后3周注射DL-Hcy；④4μg/kg Na2SeO3+Hhcy（4μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補(bǔ)充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO34μg/kg.bw）；⑤40μg/kg Na2SeO3+Hhcy（40μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補(bǔ)充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO340μg/kg.bw）；⑥80μg/kg Na

4、2SeO3+Hhcy（80μgSe+Hcy組）：低硒飼料喂養(yǎng)，注射DL-Hcy前10天補(bǔ)充Na2SeO3（連續(xù)腹腔注射 Na2SeO380μg/kg.bw）。通過尾袖法監(jiān)測(cè)SHRs收縮壓和心率變化，監(jiān)測(cè)大鼠體重，根據(jù)體重結(jié)果注射相應(yīng)劑量藥物，并且評(píng)估藥物對(duì)大鼠體重的影響；尾靜脈采血，檢測(cè)血漿中Hcy濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后麻醉大鼠，取大鼠主動(dòng)脈標(biāo)本用于以下檢測(cè)：血管張力實(shí)驗(yàn)，評(píng)估血管內(nèi)皮依賴性舒張功能；化學(xué)發(fā)光法測(cè)活性氧及NADPH氧化酶（NO

5、X）活性；透射電鏡觀察線粒體等超微結(jié)構(gòu)改變；HE染色及Masson染色，觀察血管形態(tài)、內(nèi)皮完整性、內(nèi)膜厚度及血管膠原沉積情況等；western blot檢測(cè)血管組織中GPX-1蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、各模型組注射同型半胱氨酸后，測(cè)得血漿同型半胱氨酸水平明顯升高，與Nor組比較有明顯差異（p<0.01），說明高同型半胱氨酸血癥SHR大鼠模型造模成功；而各硒補(bǔ)充組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p>0.05）。
　　2、各組大

6、鼠一般情況：大鼠體重隨著周齡逐漸增加，同段時(shí)間各組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，低Se組及低硒+Hcy組收縮壓較其它組升高7-8mmHg，各組大鼠心率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。
　　3、各組大鼠主動(dòng)脈病理形態(tài)學(xué)改變：低硒組與Nor組比較，其主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細(xì)胞增殖及膠原沉積明顯。低Se+Hcy組大鼠與低Se組比較，主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細(xì)胞增殖及膠原沉積更明顯，而硒補(bǔ)充

7、組與低Se+Hcy組比較，其主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞破壞、線粒體損傷、平滑肌細(xì)胞增殖及膠原沉積明顯改善，且隨硒水平的升高，改善明顯。
　　4、各組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張功能：低Se組較Nor組舒張百分比下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），低Se+Hcy組舒張百分比較低Se組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)意義（p<0.05）；各硒補(bǔ)充組舒張百分比較低Se+Hcy組升高，且與劑量呈正相關(guān)，其中40μgSe+Hcy組及80μgSe+Hcy組升高明顯（

8、p<0.05）。
　　5、各組大鼠主動(dòng)脈活性氧（ROS）水平：低Se組較Nor組ROS產(chǎn)生明顯增加（p<0.05），低Se+Hcy組較低Se組明顯增加（p<0.05），各硒補(bǔ)充組較低Se+Hcy組有所下降，與劑量呈負(fù)相關(guān)。加入NADPH氧化酶抑制劑（DPI）預(yù)處理后，各組ROS產(chǎn)生均較前明顯減少（p<0.05）；加入線粒體復(fù)合物Ⅰ抑制劑（ROT）預(yù)處理后，低Se組、低Se+Hcy組ROS較前減少，其中低Se+Hcy組減少明顯（p<

9、0.05）；而一氧化氮合酶抑制劑（L-NAME）預(yù)處理后，無明顯差異。
　　6、各組大鼠主動(dòng)脈NADPH氧化酶（NOX）活性：低Se+Hcy組較Nor組、低Se組升高明顯（p<0.05），而硒補(bǔ)充組較低Se+Hcy組下降，與劑量呈負(fù)相關(guān)，其中40μgSe+Hcy組及80μgSe+Hcy組下降明顯（p<0.05）。
　　7、各組大鼠主動(dòng)脈谷胱甘肽過氧化酶-1（GPX-1）蛋白表達(dá)：Nor組、低Se組之間比較，無明顯差異（p>0