CD14、NF-κBp65在膿毒癥幼年大鼠急性腎損傷中的表達及烏司他丁對其干預的實驗研究.pdf

1、目的：
　　1.應用盲腸結扎穿刺(CLP)術建立膿毒癥幼年大鼠模型，觀察膿毒癥幼年大鼠腎功能(血清肌酐、尿素氮濃度)變化及腎臟組織損傷情況。
　　2.觀察烏司他丁對膿毒癥幼年大鼠AKI血清TNF-α、IL-6水平及腎臟組織CD14、NF-κBp65表達的影響，探討其對膿毒癥幼年大鼠AKI可能的保護作用與機制。
　　方法：
　　1.實驗分組：健康清潔級4周齡雄性SD大鼠224只，隨機分成正常對照組(A組)32只、假

2、手術組(B組)32只、膿毒癥組(C組)80只、烏司他丁干預組(D組)80只，每組大鼠再隨機分為6h、12h、24h、48h4個亞組。
　　2.膿毒癥模型制備及藥物干預：A組：不行剖腹術及其他任何處理；B組：行剖腹術但不結扎盲腸及穿刺；C組：行盲腸結扎和穿刺術；D組：行盲腸結扎穿刺術造模后于0h、24h經尾靜脈注射烏司他丁50mg/kg，其他3組分別注射等量9g/L鹽水。每組大鼠在造模后6h、12h、24h、48h被麻醉后采集血和腎

3、組織標本。
　　3.檢測指標：采用全自動生化分析儀檢測血清Scr、BUN濃度；ELISA法檢測血清TNF-α、IL-6水平；RT-PCR法測定腎組織CD14 mRNA表達；免疫組織化學染色法檢測腎臟組織CD14、NF-κBp65蛋白表達含量；HE染色觀察腎臟組織病理改變等。
　　結果：
　　1.血清Scr濃度變化：與A、B組相比較，C、D組各時間點(除6h外)的血清Scr濃度升高(P<0.05)，12h開始升高，48h

4、達高峰；而D組各時間點(除6h外)血清Scr水平低于C組(P<0.01)。
　　2.血清BUN濃度變化：與A、B組相比較，C、D組各時間點的血清BUN濃度升高(P<0.01)，6h開始升高，48h達高峰；而D組各時間點血清BUN水平明顯低于C組(P<0.01)。
　　3.腎組織病理學改變：與A、B組相比較，C組6h可見腎臟組織中有少數(shù)腎小囊腔擴大，在12h、24h、48h可見明顯擴大的腎小囊腔，顯著腫脹、空泡變性的腎小管上皮

5、細胞，部分腎小球瘀血，腎臟組織中可見眾多炎性細胞浸潤，D組各時間點腎組織上述病理改變較C組明顯減輕。
　　4.血清TNF-α、IL-6水平變化：與A、B組相比較，C、D組各時間點的血清TNF-α、IL-6水平明顯升高(P<0.01)，6h血清TNF-α、IL-6水平開始升高，12h達高峰，24h、48h緩慢下降，但仍高于A、B組，而D組大鼠血清TNF-α、IL-6水平，在各時間點均顯著低于C組(P<0.01)。
　　5.腎臟

6、組織NF-κBp65蛋白表達：與A、B組相比較，C、D組各時間點腎臟組織NF-κBp65蛋白表達顯著升高(P<0.01)，6h開始升高，12h、24h、48h逐漸升高；而D組大鼠腎臟組織NF-κBp65蛋白表達，在各時間點均明顯低于C組(P<0.01)。
　　6.腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達：與A、B組相比較，C、D組各時間點腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達明顯升高(P<0.01)，6h開始升高，12h達高

7、峰，24h、48h緩慢下降，但仍高于A、B組；而D組大鼠腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達，在各時間點均低于C組(P<0.05)。
　　結論：
　　1.采用CLP法制備的膿毒癥幼年大鼠模型是穩(wěn)定、可靠的。
　　2.膿毒癥幼年大鼠早期即可出現(xiàn)一定程度腎組織損傷和腎功能障礙。
　　3.烏司他丁可能通過下調LPS受體介導信號轉導通路與NF-κB信號通路中CD14、NF-κBp65的表達，進而抑制TNF-α、IL