氧化型低密度脂蛋白、白介素-1β致動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的：脂質(zhì)過(guò)氧化和炎癥是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的兩大重要假說(shuō)，在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的不同階段是相互協(xié)同的。氧化型低密度脂蛋白(0x—LDL)是最具有致AS作用的脂質(zhì)成分，白介素一1B(IL-1B)是在全身和局部炎癥反應(yīng)中起核心作用的細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)分別研究0x—LDL和IL-1B對(duì)單核／巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞的影響以及基因表達(dá)譜的變化，為冠心病的防治探索新思路。 方法：以人前單核白血病細(xì)胞株THP—l細(xì)胞作為人單核細(xì)胞的體外培養(yǎng)模

2、型。以PMA(160nmol／L)48小時(shí)誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉?xì)胞。加入Ox-LDL(50ug／mL)72小時(shí)，使其轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞。油紅0染色、透射電鏡觀察鑒定細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)。BiostarH一40s表達(dá)譜芯片(含有4096條基因)，檢測(cè)Ox-LDL作用后的基因表達(dá)差異。巨噬細(xì)胞加入IL-1β(10ng／札)72小時(shí)，油紅O染色、電鏡觀察鑒定是否能形成泡沫細(xì)胞。BiostarH一40s表達(dá)譜芯片檢測(cè)IL一1β作用后的基因表達(dá)差異。 結(jié)果

3、：THP一1細(xì)胞在PMA作用48小時(shí)后，分化為成熟巨噬細(xì)胞。再經(jīng)Ox-LDL作用72小時(shí)后，油紅0染色提示泡沫細(xì)胞形成，透射電鏡可見(jiàn)細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集。BiostarH-40s表達(dá)譜芯片檢測(cè)示Ox-LDL刺激后差異表達(dá)3倍以上的基因共87條，其中下調(diào)共58條。上調(diào)共29條。主要涉及脂代謝有關(guān)的基因，啟動(dòng)和加重炎癥的基因，細(xì)胞凋亡有關(guān)的基因以及損傷應(yīng)激保護(hù)性基因等。巨噬細(xì)胞經(jīng)IL一1β作用72小時(shí)后，油紅0染色和透射電鏡未提示明顯的泡沫細(xì)胞形

4、成。BiostarH-40s表達(dá)譜芯片檢測(cè)示IL-1β刺激后差異表達(dá)3倍以上的基因共14條，其中下調(diào)9條。上調(diào)5條。主要涉及細(xì)胞凋亡，脂代謝，損傷應(yīng)激等基因。在差異表達(dá)3倍的水平，0x—LDL和IL一1β刺激引起的基因表達(dá)差異沒(méi)有重疊部分。 結(jié)論：0x—LDL可使THP一1細(xì)胞成功轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞，而單獨(dú)IL-1β刺激未能使THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)變成泡沫細(xì)胞?；蛐酒夹g(shù)能大規(guī)模、高通量地平行檢測(cè)不同樣品基因表達(dá)差異。本研究檢測(cè)結(jié)果提示