O-3與O-9血清型小腸結腸炎耶爾森菌競爭關系及細胞因子動態(tài)研究.pdf

1、目的：通過體外實驗和動物染毒實驗判斷O:3與O:9血清型菌株是否發(fā)生相互抑制的現象。并通過監(jiān)測O:3與O:9血清型菌株動物感染模型中白細胞介素、TNF-α、 RANTES等23種細胞因子的動態(tài)水平，初步預測O:3與O:9血清型分布變化后對細胞因子的影響，明確兩種血清型菌株的差異，為小腸結腸炎耶爾森菌的病原學鑒定以及流行病學調查提供更詳盡的參考依據。
　　方法：本次研究采用體外培養(yǎng)實驗、動物感染實驗相結合的方法。1.體外培養(yǎng)實驗:選

2、擇在同一地區(qū)、同一宿主、相同時間分離到的O:3、O:9血清型菌株各一株，傳代培養(yǎng)后，取O:3、O:9血清型菌株混合培養(yǎng)液作為混合培養(yǎng)組，同時取與混合培養(yǎng)組等量的O:3、O:9血清型菌株培養(yǎng)液單獨培養(yǎng)作為單獨培養(yǎng)組。搖菌培養(yǎng)48小時，在此期間，每隔3小時取各組菌液涂板計數菌落數。并鑒定混合培養(yǎng)平板上生長的菌落的血清型別，繪制生長曲線，以判斷體外實驗中是否存在O:3、O:9血清型菌株相互競爭抑制現象;2.動物感染實驗:用小腸結腸炎耶爾森菌體

3、建立小鼠腹腔注射感染動物模型----O:3染毒組、O:9染毒組、O:3和O:9混合染毒組。在染毒后的48小時內，從3小時起，每隔3小時從各組分別隨機抽取3只小鼠，拉頸處死后，取脾臟勻漿，涂板培養(yǎng)后別統(tǒng)計菌落數（混合染毒組的菌落先進行血清型別鑒定，再分別統(tǒng)計各血清型的數量）。繪制兩種血清型菌株在單獨染毒和混合染毒時從動物體內清除的曲線，觀察清除過程是否有變化，以判斷體內實驗中是否存在O:3、O:9血清型菌株相互抑制現象;3.采用懸液芯片技

4、術對每隔3小時處死的各組小鼠（0小時用未注射小鼠，即陰性對照表示）血清檢測包括白細胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子等23種細胞因子水平，繪制動態(tài)曲線，判斷O:3與O:9染毒在細胞因子水平上是否存在一定差異。
　　結果：1.體外培養(yǎng):單獨培養(yǎng)和混合培養(yǎng)下的O:3、O:9兩種血清型菌株的生長情況不同或不全相同（F=11.449，P＜0.001），從生長的菌量上看，單獨培養(yǎng)和混合培養(yǎng)時的O:3均比相同條件下的O:9低(P＜0.001)?；旌?/p>

5、培養(yǎng)組在27-48小時階段，O:3與O:9的菌量之比明顯低于單獨培養(yǎng)時的O:3/O:9(t=4.159， P＜0.01)。從生長速率上看，單獨培養(yǎng)和混合培養(yǎng)條件下的O:3、O:9無差異(F=0.051，P=0.985)。2.動物感染實驗:實驗動物體內的O:3呈現規(guī)律的清除曲線，表現為逐漸減少的趨勢。而O:9走勢壓低，一直“匍匐”在橫坐標上方。O:3單獨染毒、O:9單獨染毒、O:3混合染毒和O:9混合染毒的菌量之間不同或不全相同(F=5.

6、018，P=0.004)，與體外培養(yǎng)不同，單獨培養(yǎng)和混合培養(yǎng)時的O:3均比相同條件下的O:9的菌量高(P＜0.05)。混合染毒時在27-48小時階段中O:3與O:9的菌量之比明顯低于單獨染毒時的O:3/O:9(t=2.698，P=0.023)。單獨感染和混合染毒條件下的O:3、O:9從小鼠體內清除速率總體之間無差異(F=0.231，P=0.874)。3.細胞因子測定:O:3染毒組和混合組中eotaxin、TNF-α、GM-CSF和IL-

7、10等細胞因子的含量存在差異;在不同時段上，O:9染毒組和混合組中IL-1α、IL-1β、TNF-α、IL-5、IL-6、GM-CSF、IL-10和IFN-γ等細胞因子的含量上有差異，IL-1β、IL-2等十種促炎細胞因子，IL-10、IL-13、IL-17、G-CSF、GM-CSF等五種抑炎細胞因子的含量變化表明O:3、O:9之間存在交互作用，在IL-5、IL-13兩個因子上表現為協(xié)同作用，其余為拮抗作用。
　　結論：小腸結腸炎

8、耶爾森菌O:3和O:9之間的競爭抑制表現為:體外培養(yǎng)中O:9的生長量高于O:3，混合后O:9抑制了O:3的生長。體內染毒實驗提示，O:3生長能力反較O:9強，在27-48小時階段，表現為O:3更易被清除。O:3與O:9感染后，細胞因子表現各有不同。主要是一方面通過促進促炎因子eotaxin、IL-5、RANTES和抑制抑炎因子IL-10、GM-CSF、IL-17α促進炎癥的發(fā)生，表現為初期很快清除細菌，減少細菌對小鼠的進一步傷害。另一方