扎里奴思方對大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障通透性的影響及作用機制研究.pdf

1、目的：
　?、偻ㄟ^檢測神經(jīng)功能評分、腦組織含水量、腦組織病理形態(tài)和超微結構變化，觀察扎里奴思方對腦缺血再灌注損傷大鼠的腦保護及神經(jīng)功能恢復作用。
　?、谕ㄟ^檢測IgG（Immunoglobulin G）含量和AQP-4（Aquaporin-4）表達變化，動態(tài)觀察扎里奴思方對腦缺血再灌注損傷大鼠血腦屏障通透性的影響。
　?、弁ㄟ^觀察扎里奴思方對ZO-1（Zonula occludens-1）、VCAM-1（Vascula

2、r cell adhesion molecule-1）和P-gp（P-glycoprotein）表達變化，探討其調控血腦屏障通透性可能的作用機制。
　　方法：
　?、賁D雄性大鼠，月齡3個月，250只，體重(300±50)g，隨機分為假手術組A、模型組B、尼莫地平組C、扎里奴思方組D、聯(lián)合用藥組E（扎里奴思方+尼莫地平），其中后4組分別根據(jù)取材時間分為1、3、7、14d組，每組15只，假手術組10只大鼠。
　?、诰衷钚?/p>

3、腦缺血再灌注大鼠模型(MCAOR)是采用線栓阻塞大腦中動脈，2h后拔出線栓進行再灌注；
　?、奂偈中g和模型組用生理鹽水灌胃，藥物治療組分別用相應的藥物灌胃。大鼠灌胃用藥量根據(jù)生藥材含量按等效劑量換算關系計算，灌胃體積為1ml·100g-1，扎里奴思方為1.50g·mL-1；尼莫地平1.08mg·mL-1。大鼠術后3小時開始用藥，每日用藥1次。
　?、懿捎肎arcia JH評分方法對大鼠進行神經(jīng)功能評分；采用干濕重法測定腦缺血

4、再灌注損傷大鼠腦組織含水量變化；HE染色法觀察腦組織病理形態(tài)，透射電鏡下觀察大腦神經(jīng)元和微血管超微結構變化；采用免疫組織化學法檢測大鼠腦缺血再灌注損傷后IgG、ZO-1、AQP-4、P-gp、VCAM-1的表達變化。
　　結果：
　　1.大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細胞的結構變化和神經(jīng)功能恢復
　?、倌X組織病理形態(tài)改變：假手術組大鼠腦組織結構完整，神經(jīng)元細胞豐富，細胞大小均勻一致；模型組大鼠腦組織損傷側可見神經(jīng)元細胞萎縮

5、，空泡樣變，排列疏松，腦組織水腫；各藥物組神經(jīng)細胞結構有不同程度改善，尤以扎里奴思方和聯(lián)合用藥14d組恢復的尤為顯著。
　?、谀X組織超微結構改變：假手術組神經(jīng)元細胞核膜完整、核仁清晰、染色質均勻、細胞器豐富；模型組神經(jīng)元細胞損傷明顯；與模型組相比，各藥物組神經(jīng)元細胞結構均有不同程度改善，以扎里奴思方和聯(lián)合用藥組作用尤為明顯。
　?、鄞笫竽X組織含水量變化：與假手術組比較，模型組大鼠腦組織損傷側含水量明顯增高,3d達到峰值，7、

6、14d有所下降（P＜0.01，P＜0.05)；與模型組比較，藥物組各時間點大鼠腦組織損傷側含水量均降低（P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、14d組和聯(lián)合用藥各組大鼠腦含水量降低（P＜0.05）。
　?、艽笫笊窠?jīng)功能評分變化：與假手術組比較，模型組大鼠的神經(jīng)功能評分較假手術組均降低明顯（P＜0.01)；與模型組比較，藥物組大鼠各時間點神經(jīng)功能評分均顯著增高（P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方14

7、d組和聯(lián)合用藥7、14d組神經(jīng)功能評分增高（P＜0.05，P＜0.01)。與3d組比較，聯(lián)合用藥7、14d組和扎里奴思方14d組神經(jīng)功能評分均增高（P＜0.01，P＜0.05)。
　　2.大鼠腦缺血再灌注損傷后血腦屏障通透性變化的相關指標
　?、俅笫竽X組織中IgG含量變化：與假手術組比較，模型組各時間點大鼠腦組織中IgG含量1d即開始升高，3d達到峰值，7、14d有所下降，但仍高于假手術組。(P＜0.01)；與模型組比較，藥

8、物組各時間點大鼠腦組織中IgG含量降低(P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、14d組和聯(lián)合用藥組各時間點IgG含量均明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1、3d組IgG含量降低(P＜0.05)。
　?、诖笫竽X組織中AQP-4表達變化：與假手術組比較，模型組各時間點大鼠腦組織中AQP-4的表達均顯著增高（P＜0.01)，1d即開始升高，3d達到峰值，7、14d有所下降；與模型

9、組比較，藥物組各時間點大鼠腦組織中AQP-4的表達均顯著降低（P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方14d和聯(lián)合用藥7、14d組AQP-4的表達降低（P＜0.01，P＜0.05)。
　　3.扎方調控大鼠腦缺血再灌注損傷血腦屏障通透性的機制
　?、俅笫竽X組織VCAM-1表達變化：與假手術組比較，模型組各時間點VCAM-1表達均顯著增加(P＜0.01)；與模型組比較，各藥物組1、3、7d組VCAM-1表達顯著

10、降低(P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方組和聯(lián)合用藥組VCAM-1表達有降低趨勢，但無顯著的統(tǒng)計學差異。
　?、诖笫竽X組織ZO-1表達變化：與假手術組比較，模型組各時間點ZO-1表達均顯著降低(P＜0.01)；與模型組比較，藥物組各時間點ZO-1表達均顯著增加(P＜0.01)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方組和聯(lián)合用藥組ZO-1表達均顯著增加(P＜0.01)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1、3d組ZO-1表達顯著增加(P＜

11、0.01)。
　?、鄞笫竽X組織P-gp表達變化：與假手術組比較，模型組各時間點P-gp表達均顯著增加(P＜0.01)；與模型組比較，尼莫地平7、14d組、扎里奴思方3、7、14d和聯(lián)合用藥3、7、14d組P-gp表達明顯降低(P＜0.01，P＜0.05)；與尼莫地平組比較，扎里奴思方3、7、14d組和聯(lián)合用藥3、7、14d組P-gp表達明顯降低(P＜0.05)；與扎里奴思方組比較，聯(lián)合用藥1d組P-gp表達明顯降低(P＜0.05)

12、。
　　結論：
　　1.扎里奴思方對大鼠腦缺血再灌注損傷神經(jīng)細胞有明顯的保護作用，減輕腦水腫，促進神經(jīng)功能恢復，且隨著用藥時間的延長，其腦保護作用呈逐漸增強趨勢。
　　2.大鼠腦缺血再灌注損傷后血腦屏障通透性呈現(xiàn)先增強后降低變化，3d達到峰值，扎里奴思方降低血腦屏障通透性的作用顯著，且隨著時間的延長，其作用逐步增強。聯(lián)合用藥在腦缺血再灌注損失早期降低血腦屏障通透性的作用更為明顯。
　　3.扎里奴思方降低血腦屏障通