SLC24A3基因的遺傳EPHX1啟動(dòng)子甲基化與多囊卵巢綜合征的相關(guān)性研究.pdf

1、本文分兩個(gè)部分進(jìn)行研究。
　　第一部分 SLC24A3基因在多囊卵巢綜合征中的作用
　　作為溶質(zhì)運(yùn)載蛋白家族的一員，SLC24A3（NCKX3）蛋白起著鉀依賴性Na+-Ca2+質(zhì)子泵的作用，在轉(zhuǎn)運(yùn)鈣離子和維持細(xì)胞內(nèi)鈣離子的電生理平衡起著重要的作用。最近有研究發(fā)現(xiàn)，多囊卵巢綜合征患者卵巢組織中SLC24A3基因的表達(dá)存在異常，但是對(duì)于SLC24A3基因多態(tài)性和PCOS易感性關(guān)聯(lián)，目前尚無深入研究。本實(shí)驗(yàn)在206個(gè)PCOS病人中

2、進(jìn)行SLC24A3基因多態(tài)性關(guān)聯(lián)研究，并對(duì)相關(guān)位點(diǎn)與一系列內(nèi)分泌指標(biāo)進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SLC24A3基因的3’-UTR上的rs6046271位點(diǎn)與PCOS病人中的雌二醇濃度和葡萄糖耐受能力存在顯著的相關(guān)性(P＜0.01）。隨后，我們?cè)?93T細(xì)胞進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明rs6046271位點(diǎn)的A＞G變異顯著降低了熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)(p＜0.01)。此外，siRNA的干擾實(shí)驗(yàn)表明SLC24A3基因的表達(dá)干擾會(huì)造成顆粒細(xì)

3、胞癌KGN細(xì)胞系分泌合成雌二醇濃度顯著上調(diào)(p＜0.001)。
　　這些結(jié)果證實(shí)了SLC24A3基因的表達(dá)和人類顆粒細(xì)胞分泌雌二醇的能力存在關(guān)聯(lián)，在一定程度上反應(yīng)了多囊卵巢綜合征患者的疾病嚴(yán)重程度。這項(xiàng)研究也為多囊卵巢綜合征的病理研究提供了理論依據(jù)。
　　第二部分 EPHX1啟動(dòng)子甲基化與多囊卵巢綜合征患者的關(guān)聯(lián)研究
　　甾體類激素的生物合成及代謝途徑在多囊卵巢綜合征的發(fā)病機(jī)制中扮演著重要的角色。然而到目前為止，參與甾

4、體類激素的生物合成途徑的基因的甲基化水平與多囊卵巢綜合征的關(guān)聯(lián)研究還很少。本實(shí)驗(yàn)中，我們采取MassARRAY定量甲基化檢測(cè)分別在正常人組和PCOS病人組的外周血中檢測(cè)了EPHX1、SRD5A1和CYP11A1等基因啟動(dòng)子區(qū)的CpG位點(diǎn)的甲基化水平。結(jié)果顯示，SRD5A1基因和CYP11A1基因的甲基化水平與PCOS病人并無相關(guān)性，但是EPHX1啟動(dòng)子區(qū)的一些CpG位點(diǎn)的甲基化水平在PCOS病人組和對(duì)照組中存在顯著性差異。這些CpG(如

5、CpG島13-14(p＜0.05)，15-16(p＜O.001)，19-24(p＜0.001)以及CpG位點(diǎn)CpG_53(p＜0.01)和CpG_54(p＜O.05》的甲基化水平在PCOS病人組（32人）中要顯著低于對(duì)照組（32人）。其中，CpG島13-14和19-24在病人組的甲基化水平在另一個(gè)116個(gè)獨(dú)立樣本中也表現(xiàn)出較低的水平(p＜0.05)。隨后，我們?cè)陬w粒細(xì)胞癌KGN細(xì)胞系中進(jìn)行了EPHX1基因的干擾和過表達(dá)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明EP