A549-ABCG2耐藥細胞系的建立和功能研究.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定表達ABCG2蛋白的A549-ABCG2細胞系并觀察其生物學特性變化，為選擇敏感化療藥物及制定臨床治療方案提供研究基礎。方法：非小細胞肺癌組織標本中提取總RNA，RT-PCR獲得ABCG2全序列基因后插入pcDNA3.1質粒，轉染A549細胞系，用G418挑取克隆穩(wěn)定篩選并命名為A549-ABCG2細胞。RT-PCR及Westernblot鑒定克隆基因及蛋白表達。通過流式細胞術，MTT法檢測ABCG2高表達細胞的藥物敏感性

2、，檢測ABCG2蛋白ATP激酶活性，分析其與耐藥之間的相關性。結果：RT-PC吸Westernblot顯示A549-ABCG2細胞目的基因和蛋白表達穩(wěn)定。經(jīng)流式細胞儀檢測后發(fā)現(xiàn)，A549凋亡細胞明顯多于A549-ABCG2細胞且使用多柔比星后Gl峰前出現(xiàn)明顯凋亡峰，細胞凋亡率為6.7％，使用羥基喜樹堿后A549-ABCG2細胞S期減少14.7％，Gl期增加了13.5％;A549細胞S期增加了18.9％，Gl期減少了18.5％。MTT實驗