實驗兔VX2腫瘤和轉移淋巴結SonoVue超聲造影與血管生成比較研究.pdf

1、轉移是影響惡性腫瘤患者預后的重要因素之一。淋巴轉移的識別和顯示技術成為腫瘤轉移的診斷、治療以及腫瘤.宿主免疫作用機制研究的一個窗口，通過阻斷或干預腫瘤新生淋巴管的細胞生長因子的表達，有望達到阻止腫瘤細胞淋巴轉移的目的。由微觀結構改變導致的淋巴結結構和功能的相應改變，也是影像學研究的熱點之一。由于惡性腫瘤本身沒有與身體正常循環(huán)系統(tǒng)直接聯系的通道，必須通過血管生成誘導鄰近血管向腫瘤發(fā)出新的血管即腫瘤新生血管才可以持續(xù)生長。因此，我們的研究假

2、設腫瘤淋巴結轉移引起或產生淋巴結自身血管結構的改變，通過經靜脈超聲造影技術，希望能夠顯示這種淋巴結內部的微血管改變，進而對淋巴結的功能和結構狀況進行全面的評價，確定淋巴結有無轉移。
　　 本實驗對兔后腿肌肉軟組織VX2腫瘤及其轉移淋巴結進行SonoVue超聲造影顯像，研究腫瘤和轉移淋巴結微血管灌注模式，并與腫瘤和淋巴結新生血管分布的病理特點對照，分析超聲造影的血管灌注特點與微血管分布的關系，探討SonoVue超聲造影顯像對腫瘤及

3、淋巴結轉移的診斷價值。
　　 論文一：
　　 方法：
　　 成年的大耳白兔16只，體重2.0～2.8 kg。16只為實驗組，隨機分為4組，每組4只，每只兔雙側后腿肌肉內種植VX2腫瘤組織懸液1ml。荷瘤兔(Tumorbearing rabbits)由中國醫(yī)科大學醫(yī)學影像研究所惠贈，VX2腫瘤原系來自同濟醫(yī)科大學。種植腫瘤后第14d、21d、28d、35d進行普通超聲和造影超聲檢查。
　　 超聲檢查應用德國

4、西門子Sequoia-512彩色多普勒超聲顯像儀，線陣探頭15L8Ws，頻率7～12MHz，配備專用小器官超聲造影軟件。采用Bracco公司聲諾維(SonoVue)超聲造影劑，造影微泡為磷脂包裹的六氟化硫。實驗兔肌肉注射速眠新(0.1～0.2ml/Kg體重)，麻醉后仰臥固定于實驗臺上，剪掉并剔除兔后腿內側、胭窩、腹股溝區(qū)、下腹部的兔毛，以便超聲觀察。普通超聲檢查后選擇腫瘤最大切面，采用低機械指數相干脈沖系列成像(Coherent pul

5、se sequences，CPS)造影及組織優(yōu)化技術(tissue equalization technique，TEQ)，選擇FR200幀/秒，觸發(fā)時間AT=125ms。兔耳緣靜脈建立靜脈通路，彈丸式注入SonoVue造影劑稀釋液0.3ml，并迅速跟進生理鹽水5ml。記時并動態(tài)存儲超聲造影圖像。造影結束后回放造影增強過程，由3名超聲醫(yī)師對造影增強模式進行分析和描述，并應用ACQ軟件進行時間一強度曲線分析，感興趣區(qū)的放置選擇腫瘤增強區(qū)。

6、避開鄰近較大血管。測定3次取平均值。測得腫瘤不同部位開始增強時間(Arrival Time，AT)、達峰時間(Time To Peak，TTP)、峰值強度(Peak Intensity，PI)。所有測量參數以(-x±s)表示。
　　 實驗結束空氣栓塞處死實驗兔，切除VX2腫瘤，標本放入中性福爾馬林溶液固定24小時后，石蠟包埋。進行常規(guī)HE染色和S-P免疫組化法檢測CD34染色陽性細胞，所有染色均進行抗原修復。CD34陽性細胞表現

7、為棕黃或棕褐色顆粒，表達于血管的內皮細胞胞漿，以陽性著色的單個內皮細胞或內皮細胞簇為陽性微血管。
　　 論文二：
　　 健康成年的大耳白兔24只，隨機分成兩組。實驗組16只，對照組8只。實驗組首先復制VX2腫瘤荷瘤兔模型，每只兔雙側后腿肌肉內種植VX2腫瘤組織懸液1ml，種植腫瘤后分別于第3，4，5，6周超聲造影觀察兔胭窩及髂淋巴結轉移情況。對照組淋巴結反應性增生模型兔采用兩側脅腹部皮下接種蛋黃懸液，第1周和2周后各注射

8、1次，第3周開始進行淋巴結造影。
　　 超聲檢查應用德國西門子Sequoia-512彩色多普勒超聲顯像儀，15L8Ws線陣探頭，頻率7～12MHz，配備專用小器官超聲造影軟件。采用Bracco公司聲諾維(SonoVue)超聲造影劑，造影微泡為磷脂包裹的六氟化硫。實驗兔肌肉注射速眠新(0.1～0.2ml/Kg體重)，麻醉后仰臥固定于實驗臺上，剪掉并剔除兔后腿內側、腘窩、腹股溝區(qū)、下腹部的兔毛，以便超聲觀察。普通超聲檢查后選擇腫瘤最

9、大切面，采用低機械指數CPS超聲造影及TEQ技術，選擇FR=200，觸發(fā)時間△T=125ms。兔耳緣靜脈建立靜脈通路，彈丸式注入SonoVue造影劑稀釋液0.3ml，并迅速跟進生理鹽水5ml。記時并動態(tài)存儲超聲造影圖像。造影結束后回放造影增強過程，由3名超聲醫(yī)師對造影增強模式進行分析和描述，并應用ACQ軟件進行時間一強度曲線分析，感興趣區(qū)的放置選擇整個淋巴結，避開鄰近較大血管。測定3次取平均值。測得造影開始增強時間(Arrival Ti

10、me，AT)、達峰時間(TimeTo Peak，TTP)、峰值強度(Peak Intensity，PI)。所有測量參數以(-x±s)表示。
　　 實驗結束空氣栓塞處死實驗兔，切取造影觀察的淋巴結，沿淋巴結長軸剖開，中性福爾馬林溶液固定24小時后，石蠟包埋。常規(guī)HE染色。S-P免疫組化法檢測CD34染色陽性細胞，所有染色均進行抗原修復。
　　 采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。實驗組和對照組造影增強時間曲線參數值用(-

11、x±s)表示。兩組淋巴結大小和兩組間造影參數的比較采用q檢驗；造影結果與淋巴結性質的相關性比較采用Logistic回歸分析，p值<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　 論文一：
　　 實驗結果：
　　 1、VX2腫瘤種植后，4只實驗兔死亡，其余12只腫瘤種植成功，共38個瘤體，多發(fā)9只，單發(fā)3只。二維超聲表現為低回聲，壞死后內部出現不規(guī)則無回聲。CDFI和CDE顯示腫瘤周邊型分布條狀或點狀血流信號。
　　 2

12、、超聲造影結果：腫瘤增強模式表現為從周邊開始增強向內部不同程度增強，13～20秒腫瘤增強明顯，以后減弱，40秒左右排出。內部壞死區(qū)無增強。ACQ曲線形態(tài)分析：腫瘤邊緣增強區(qū)緩慢增強，峰頂圓鈍，下降支平均持續(xù)40秒左右，緩慢排除造影劑；內部無增強區(qū)與本底強度一致，呈平直線狀。
　　 3、病理結果顯示橫紋肌組織內可見VX2腫瘤細胞呈巢狀或彌漫分布，瘤巢間含有大量不成熟的毛細血管和豐富的纖維組織。CD34免疫組化顯示陽性染色的內皮細胞

13、位于VX2腫瘤細胞旁和纖維間質內。
　　 4、免疫組化結果與超聲造影增強模式對照：超聲造影顯示VX2腫瘤組織表現單一增強模式，動脈期快速灌注，一過性增強；腫瘤增強起于周邊部，內部不能達到完全增強。CD34免疫組化結果顯示，種植于橫紋肌組織內的腫瘤組織在鄰近血管處顯示新生血管存在；在腫瘤組織周圍可見新生血管分布，但不能形成正常管腔結構，僅顯示為散在或聚集成簇的陽性染色區(qū)。腫瘤中央存在灶性壞死，該處未見CD34染色陽性細胞。腫瘤增強

14、模式與CD34染色陽性區(qū)的血管分布一致。
　　 論文二：
　　 1、實驗組兔死亡4只。實驗組發(fā)現淋巴結38個，轉移淋巴結共28個，占實驗組淋巴結總數的73.7％。每只兔均有1個或以上轉移淋巴結；對照組淋巴結16個，病理均無轉移。
　　 2、實驗組和對照組淋巴結短徑在兩組間差別顯著(P<0.05)，普通超聲顯示轉移淋巴結淋巴門不清晰或消失，淋巴結內部回聲不均質；髂淋巴結可顯示并有融合。對照組和未轉移淋巴結顯示胭窩淋

15、巴結可見淋巴門，未見淋巴結融合及髂淋巴結顯示。
　　 3、超聲造影顯示轉移淋巴結表現為邊緣型增強或內部不均勻增強，未轉移淋巴結全部表現為中央開始的彌漫均勻增強。良惡性淋巴結造影增強時間一強度曲線分析比較結果顯示，惡性組達峰時間(9.76±1.90秒)與良性組(15.44±3.71秒)，差異顯著(P<0.05)。超聲造影診斷淋巴結轉移的特異度72.7%，陽性預測值84.2%。與普通超聲結果比較(特異度57.1%，陽性預測值73.7

16、%)，特異度和陽性預測值增加。
　　 4、病理顯示轉移淋巴結腫瘤細胞破壞淋巴結正常結構，腫瘤轉移區(qū)CD34陽性血管內皮細胞表達增多；腫瘤細胞侵犯的淋巴結內部局灶性壞死區(qū)，未見CD34陽性染色血管內皮細胞分布。反應性增生淋巴結保持原有結構和血管分布，CD34染色陽性細胞在反應性增生淋巴結未見顯示。
　　 結論：
　　 1、SonoVue低機械指數超聲造影是一種敏感而安全的評價腫瘤血管生成的檢查方法，兔VX2軟組織腫