重組人降鈣素基因相關肽在原核中的融合表達、純化研究.pdf

1、α降鈣素基因相關肽具有強大的舒張血管、降低血壓等多種生理活性，是迄今發(fā)現的人體內舒血管活性最強的一種多肽。α降鈣素基因相關肽參與多種功能的調節(jié)，對α降鈣素基因相關肽的研究也從最初的神經系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)擴展到呼吸系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)、胃腸道系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)。α降鈣素基因相關肽在體內，尤其是神經和心血管系統(tǒng)分布廣泛，并有顯著的心血管效應，對心血管疾病的發(fā)生和防治有重要意義。 采用大腸桿菌偏愛的密碼子對α降鈣素基因相關肽基因進行了

2、優(yōu)化設計，用搭橋PCR方法獲得hαCGRP基因，克隆到表達載體中。測序結果表明，構建的表達載體中的外源基因的序列與理論設計的基因序列完全一致。 融合蛋白基因在大腸桿菌中誘導表達，表達產物經凝膠掃描分析，融合蛋白占總蛋白的25％。摸索誘導表達條件，并擴大至發(fā)酵罐進行發(fā)酵培養(yǎng)和表達，獲得大量菌體。破菌離心后融合蛋白表達完全在上清。上清液依次經過ChelatingF.F.親和層析柱、SephacrylS-200分子篩柱純化，獲得了95

3、％以上純度的融合蛋白。經WesternBolt免疫印跡鑒定該融合蛋白具有抗原性。經體內對融合蛋白的生物學活性進行的初步研究表明該蛋白具有降低血壓等α降鈣素基因相關肽的生物學活性。 本研究成功構建了α降鈣素基因相關肽融合蛋白表達載體，并在大腸桿菌中獲得表達。通過基因工程獲取較高純度和生物學活性的α降鈣素基因相關肽融合蛋白，同時對α降鈣素基因相關肽的基因的表達、純化等實驗條件進行摸索和探討，為基因工程α降鈣素基因相關肽的進一步研究積