同種大白兔頸動脈移植后血管形態(tài)及腫瘤壞死因子變化的意義.pdf

1、血管缺損是臨床工作中常遇到的問題之一，由于優(yōu)質的人造大血管的發(fā)展，在臨床上已經取得了很好的效果。但是小血管的應用令人失望，目前小血管的修復主要是用自體血管。血管移植物已經被廣泛應用于血管的重建和修復。但是在臨床實際應用過程中，由于自體血管來源的限制，使一些病人不能得到及時的治療。如果能及時提供具有活性的同種異體血管作為替代物，就會使許多患者得到更有效的治療。而同種異體血管移植后由于缺血再灌注損傷和免疫排斥反應等原因影響了移植血管的成功率

2、。腫瘤壞死因子是一種自分泌的促炎癥細胞因子，在缺血再灌注損傷和同種移植排斥反應可導致移植器官組織機能障礙。 本實驗通過建立同種大白兔頸動脈移植模型，從病理形態(tài)學、酶學活性及基因表達等方面對移植后血管腫瘤因子(Tumor necrosis factor TNF)變化的意義進行探討，為實際工作中尋找一種有效的血管處理和保存的方法提供理論依據(jù)。 實驗材料： 1．實驗動物雄性成熟日本大白兔，體重1.65-2.5kg，30

3、只；新西蘭大白兔5只，體重2.8-3.2kg。中國醫(yī)科大學附屬二院動物室提供。 2．主要實驗儀器及試劑顯微外科手術放大鏡(Keeler 2.5倍)、SSW-3型顯微外科手術器械、深低溫冷凍冰箱(-86C FORMA-725)、Citadel2000型脫水機/Thermo全自動切片機(SHANDON Co．)、低溫高速離心機(HERMLE Z383K Co．)、PTC-100PCR擴增儀、KODAK ID型凝膠成像系統(tǒng)分析儀、S-

4、500P型紫外線可見光連續(xù)分光光度儀(法國SECOMAM公司)、總RNA提取及cDNA合成試劑盒(日本TaKaRa生物技術有限公司)、TNF引物(北京奧科生物工程公司)、TNF免疫組織化學試劑盒(北京中山生物工程公司)、RPMI 1640營養(yǎng)液(美國Gibco BRL公司)、DMSO(德國Merck公司)、青霉素鈉(PC，400萬單位)、硫酸鏈霉素(SM，100萬單位)。 實驗方法： 動物模型按人類無菌手術標準進行各種試

5、劑配制及自體/異體頸動脈移植手術。其中，A組采用自體血管原位植入。B組采用新鮮采集的血管肝素鹽水(HNS，25 IU/ml)沖洗后立即植入受者頸動脈。C組采用PC/SM(50 IU/ml)處理后室溫密閉保存(72小時內使用)的異體血管植入。D組植入PC/SM(50 IU/ml)處理后液氮保存的血管。術后觀察1-4周。取材時記錄移植動脈周圍情況及動脈外觀、直徑、是否通暢、有無狹窄。采集受者植入血管等標本分別保存于EDTA-2Na/抑肽酶塑

6、料管和液氮中備檢。 檢測指標和方法用HE染色法觀察移植血管病理學改變；用免疫組化方法觀察移植血管和心肌的TNF變化；用RT-PCR方法檢測移植血管TNF的變化。 統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)均經SPSS軟件進行檢驗，p<0.05認為有顯著差異。 結果： 1，移植血管形態(tài)學改變：各組移植段血管均有不同程度的炎癥或損傷性反應。B組血管損傷最為明顯，幾乎囊括了其它各組血管損傷的各種表現(xiàn)，且出現(xiàn)血管壞死、結構破壞，血管腔內大量

7、機化血栓侵蝕血管壁、外膜水腫增厚以及外膜大量炎性細胞浸潤、血管中膜增厚明顯等。D組血管結構保持較好，但也出現(xiàn)了血栓形成、腔內血栓機化溶解。各個亞組的情況類似。 2，血管移植后通常情況：血管移植后開放近端血管遠端血管充盈為血管通暢標準，即時通暢率為100％.取材時先剪斷遠端移植血管，以有血液流出為通暢標準，結果A組通暢率100％(3/3)，B組44.4％(4/9)，C組55.6％(5/9)，而D組77.8％(7/9)。 3

8、.從各組血管組織切片中表達情況和統(tǒng)計結果可以看出，A組和D組TNF表達率明顯低于B組和C組，B組為最高，與其它各組比較P<0.05。 4.心肌組織切片結果與血管移植組有類似的結果：B組心肌的TNF的表達高于其他組，與A、D組比較P<0.05，而與C組無顯著差異性。 5．B組TNF -α基因水平(mRNA)的表達較A組明顯增強(P<0.05。其他各組與A和組間比較，無顯著性差異。 結論： 1．同種動脈血管移

9、植后血管損傷在病理學上表現(xiàn)為血管壁以LC為主的炎性細胞浸潤、血管內膜增生、中膜增厚。嚴重者出現(xiàn)血管壁纖維素樣壞死和血管結構破壞，甚至有血栓形成。 2．經抗生素處理常溫下保存的同種血管植入后，血管功能和結構難以維持，病理學表現(xiàn)并不優(yōu)于未經處理而直接植人的同種血管。 3．經抗生素處理并在液氮中保存的同種血管植入后效果最佳。其臨床效果與自體血管移植相近。 4．血再灌注損傷和/或免疫排斥反應能激發(fā)移植血管和全身各組織器官