美滿霉素對癲癇大鼠海馬神經元凋亡的影響.pdf

1、癲癇是一種常見的慢性神經系統(tǒng)疾病，由于其發(fā)病機制的復雜性和癲癇類型的多樣性，癲癇的防治至今仍然是神經科學工作者攻克的重點課題。癲癇發(fā)作可以導致腦內多種凋亡相關基因的表達和神經元的凋亡，并且以海馬神經元凋亡最為顯著，這可能是導致癲癇患者后期認知功能障礙和情感障礙的原因之一。有研究表明，第二代半合成的四環(huán)素類衍生物美滿霉素（Minocycline，MC），在中樞神經系統(tǒng)損傷和神經退行性疾病的動物模型中具有神經保護作用，并提出美滿霉素的神經保

2、護機制與其減少神經炎性和阻礙細胞死亡這兩個方面有關，但它在癲癇中的研究還比較少，因此，本研究旨在探討美滿霉素對癲癇模型大鼠海馬神經元的抗凋亡保護作用，以期為癲癇的臨床治療提供實驗依據。
　　 采用SD 雄性大鼠96只，隨即分為三組：生理鹽水對照組（NS組），海人酸致癇組（KA組）和美滿霉素預處理+海人酸組（MC+KA組）。KA組側腦室注射KA(2μg/kg)以致癇，NS組則注射等容量的生理鹽水，MC+KA組先腹腔注射MC（45m

3、g/kg）預處理，12h后側腦室注射KA(2μg/kg)以致癇，KA 處理30min后再次腹腔注射MC 90mg/kg。各組大鼠在側腦室注射造模后觀察其行為學變化2 小時左右；并于存活2h、8h、24h和48h后分批處死動物。采用免疫組織化學SABC 法顯示大鼠海馬部位細胞色素 C(Cytochrome C，Cyt C)和caspase-3 免疫反應的變化；RT-PCR法檢測caspase-3 mRNA 含量；WesternBlot 法

4、檢測Bcl-2和Bax 蛋白表達情況。
　　 結果發(fā)現，NS組大鼠行為表現無異常；KA 致癇組大鼠癲癇發(fā)作達Ⅳ～Ⅴ級，可持續(xù)2h 左右；MC+KA組大鼠癲癇發(fā)作強度較KA 致癇組明顯減弱，為Ⅱ～Ⅲ級。免疫組織化學方法結果顯示：在KA 致癇后2h Cyt C 即開始有陽性表達，8h 達到高峰，24h表達減少，而MC 預處理明顯減弱此效應。RT-PCR和免疫組織化學方法結果顯示caspase-3 mRNA的含量及caspase-3

5、免疫反應性在24h 時間點三組之間無明顯差異，在48h 時間點，KA組明顯高于對照組(P<0.05)，MC 預處理則明顯拮抗KA 誘導的caspase-3 高表達。Western Blot 結果顯示：大鼠海馬組織Bcl-2和Bax 蛋白的表達水平呈負相關。與對照NS組相比，KA組Bcl-2 蛋白表達降低而Bax 蛋白表達升高；與KA組相比，在MC+KA組Bcl-2 蛋白表達升高而Bax 蛋白表達降低。且Bcl-2/Bax 值在48h 時

6、間點比24h 時間點更低。
　　 上述研究結果提示，KA 致癇能誘導大鼠海馬神經元凋亡，而MC 預處理不僅能抑制KA 誘導的致癇效應，而且能減少Cyt C 從線粒體釋放入胞漿，從而減少凋亡體的生成；并抑制凋亡效應蛋白caspase-3的激活，抑制細胞凋亡的發(fā)生；另外還通過增大Bcl-2/Bax的比值抑制凋亡發(fā)生，這些結果提示MC 對KA 致癇大鼠海馬神經元發(fā)揮了抗凋亡的神經保護作用。這對于臨床癲癇防治、神經保護有重要的啟示意義。