吲哚胺2，3-雙加氧酶介導(dǎo)鼻咽癌腫瘤免疫耐受的機制初探.pdf

1、鼻咽癌是一種在中國南方地區(qū)發(fā)病率較高的惡性腫瘤。盡管鼻咽癌患者體內(nèi)存在腫瘤特異性T淋巴細胞，而且鼻咽癌組織內(nèi)往往有大量淋巴細胞浸潤，但是大部分中晚期的鼻咽癌病人即使接受了相應(yīng)的治療后病情仍然惡化。近年來，鼻咽癌的腫瘤免疫治療逐漸成為研究熱點。為了發(fā)揮腫瘤免疫治療的最佳療效，人們必須對影響免疫治療效果的腫瘤免疫耐受機制有一個清楚而全面的認識。因此，為了闡明鼻咽癌患者體內(nèi)的腫瘤免疫耐受機制，尋找浸潤的淋巴細胞無法清除鼻咽癌細胞的原因，本研究

2、主要探討了吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)在鼻咽癌中的表達特性以及鼻咽癌表達IDO對淋巴細胞殺傷活性的影響，以期為更合理地設(shè)計鼻咽癌的腫瘤免疫治療方案提供一定的理論依據(jù)。 主要研究包括以下三個部分： 一、IDO蛋白表達檢測和酶活性分析方法的建立 通過制備兔抗人IDO多克隆抗體和建立檢測IDO降解色氨酸所得的特異性代謝產(chǎn)物犬尿氨酸的高效液相色譜法(HPLC)，本部分檢測了多種腫瘤細胞和組織內(nèi)IDO的表達情況。結(jié)果顯

3、示，所制備的抗體效價高、特異性好，適用于在免疫印跡法(WB)和免疫組化法(THC)中檢測腫瘤細胞內(nèi)和組織內(nèi)IDO蛋白的表達情況；所建立的定量檢測犬尿氨酸的HPLC快速、簡便，適于大批量樣品的檢測。本部分為檢測細胞內(nèi)IDO的蛋白表達和酶活性奠定了基礎(chǔ)。 二、IDO在鼻咽癌中的表達特性 利用IHC、WB和HPLC，本部分檢測了IDO在鼻咽癌組織中表達、γ干擾 素(IFN-γ)對CNE2鼻咽癌細胞內(nèi)IDO蛋白表達和酶活

4、性的影響以及激活的淋巴細胞對CNE2細胞內(nèi)IDO蛋白表達的影響。結(jié)果顯示，鼻咽癌患者腫瘤組織中存在IDO的表達；CNE2細胞在IFN-γ和激活的淋巴細胞的作用下能表達IDO；IFN-γ濃度低至5 U·ml-1就能誘導(dǎo)CNE2細胞表達IDO；CNE2細胞在IFN-γ作用下8小時后即能表達IDO，而且CNE2細胞內(nèi)的IDO一旦被合成，蛋白不易降解，可在細胞內(nèi)穩(wěn)定存在達72小時；CNE2細胞內(nèi)IDO酶活性隨著IFN-γ濃度的提高而增強。本部分

5、對IDO在鼻咽癌中的研究在國內(nèi)外尚屬首次。 三、鼻咽癌細胞表達IDO對淋巴細胞的影響 本部分主要模擬機體內(nèi)的腫瘤細胞和淋巴細胞相互作用的微環(huán)境，觀察IFN-γ對鼻咽癌細胞增殖的影響、人淋巴細胞在IDO高表達環(huán)境中的凋亡情況、釋放IFN吖情況以及對腫瘤細胞的殺傷能力，同時運用IDO抑制劑1-MT，觀察抑制IDO的活性對淋巴細胞殺傷活性的影響。MTT法和[3]-TdR摻入法的實驗結(jié)果顯示，IFN-γ對CNE2鼻咽癌細胞的增殖

6、無明顯抑制作用；Annexin V染色檢測法和WB結(jié)果顯示，IDO的表達對T淋巴細胞的凋亡和淋巴細胞釋放IFN-γ的能力并無明顯影響；LDH釋放檢測的實驗結(jié)果顯示，人外周淋巴細胞在IDO高表達的環(huán)境中對腫瘤細胞的殺傷活性明顯降低，給予1-MT能使人外周淋巴細胞在IDO高表達的環(huán)境中對腫瘤細胞的殺傷活性大部分恢復(fù)至正常水平。本部分結(jié)果提示我們，鼻咽癌細胞可通過表達IDO使淋巴細胞殺傷能力減弱而導(dǎo)致鼻咽癌患者產(chǎn)生腫瘤免疫耐受，這可能是浸潤到