人鼻黏膜上皮細胞的培養(yǎng)及Hbd-2的誘導.pdf

1、目的:
　　 以正常鼻咽上皮細胞NP69作參照，建立人鼻黏膜原代上皮細胞模型，探索脂多糖(LPS)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)對人鼻黏膜上皮細胞誘導hBD-2的可表達性和差異性，以及不同濃度與誘導hBD-2表達的強弱和持續(xù)時間的關系。
　　 方法:
　　 1.采用人下鼻甲黏膜，以Ⅰ型膠原酶加胰酶消化法分離上皮細胞，用添加了生長因子和牛下丘腦提取物的Keratinocyte-SFM培基，在體外培養(yǎng)原代鼻黏膜上皮細

2、胞，并通過免疫細胞化學法對培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞和復蘇的NP69細胞進行細胞角蛋白鑒定。
　　 2.應用PCR和免疫細胞化學技術檢測脂多糖(LPS)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)誘導鼻黏膜上皮細胞和NP69細胞中hBD-2的表達量。
　　 結果:
　　 1.體外培養(yǎng)的人鼻黏膜原代細胞經細胞角蛋白AE1/AE3鑒定為上皮細胞，陽性率高達92.97％，較NP69細胞高;
　　 2.不同質量濃度的LPS(1、10

3、mg/L)、TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)刺激人鼻黏膜上皮細胞4h后，hBD-2mRNA表達呈劑量依賴性升高，兩兩比較差異顯著(p＜0.05)。
　　 3.不同質量濃度的LPS(0.01、0.1、1、10mg/L)、TNF-a(0.1、1、10、100ng/ml)刺激人鼻咽上皮細胞(NP69)4h后，hBD-2mRNA表達均較對照組（未刺激組）降低，兩兩比較差異顯著(p＜0.05)。
　　 4.一定濃度

4、的LPS(10ug/ml)刺激培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞，hBD-2mRNA的表達量0-4h逐漸升高，4-24h逐漸下降，兩兩比較差異顯著(p＜0.05);一定濃度的LPS(10ug/ml)刺激培養(yǎng)的NP69不同時間后，hBD-2mRNA的表達量無明顯增加，兩兩比較無明顯差異(p＞0.05)5.一定濃度的LPS(10ug/ml)、TNF-a(100ng/ml)刺激培養(yǎng)的鼻黏膜上皮細胞和NP69細胞4h后，免疫細胞化學證實鼻黏膜上皮細胞胞漿中h

5、BD-2蛋白表達;NP69細胞胞漿基本無hBD-2蛋白表達。
　　 結論:
　　 1.本實驗用K-SFM培基成功培養(yǎng)了人鼻黏膜上皮細胞。
　　 2.脂多糖(LPS)和腫瘤壞死因子a(TNF-a)兩種不同的誘導因素均可誘導人鼻黏膜上皮細胞中hBD-2的表達，這種表達不僅具有差異性，而且具有劑量依賴性和時間依賴性。
　　 3.相同劑量的LPS誘導鼻黏膜上皮細胞和NP69細胞兩種不同細胞hBD-2的表達時，其時