低滲核黃素-UVA誘導的兔角膜交聯術-去上皮與保留上皮的差異性研究.pdf

1、目的:
　　 核黃素/UVA誘導的角膜膠原交聯術可以增加膠原纖維的交聯度，增強角膜生物力學特性，阻止圓錐角膜、角膜膨隆進展，用于治療進展期圓錐角膜取得理想效果。研究表明，角膜膠原交聯治療時，若角膜厚度大于400μm，紫外線不會損傷角膜內皮細胞、晶狀體、視網膜等組織。但圓錐角膜是以角膜進行性薄化為特征，晚期患者角膜厚度多低于400μm，從而一定程度限制了該技術在圓錐角膜的應用。研究也證實，低滲核黃素溶液點眼可以增加角膜厚度，可以用

2、于薄角膜患者的治療;由于核黃素分子量較大，角膜上皮的完整性顯著影響核黃素的滲透，影響交聯療效。本研究旨在探討兔眼去角膜上皮與保留角膜上皮時，核黃素/UVA誘導的角膜交聯術后角膜生物力學變化及對其角膜基質細胞的影響。
　　 方法:
　　 1.紫外線照射
　　 將兔全麻后開瞼器開瞼，去上皮組刮除中央7.5mm的角膜中央區(qū)域上皮，照射前半小時開始滴0.1％核黃素低滲溶液，角膜測厚儀測量角膜厚度，至厚度超過400μm，于

3、裂隙燈下觀察核黃素已進入前房后開始照射。照射時間30min、照射距離50mm、光束直徑為7.5mm、波長為370nm，能量密度為3mW/cm2，相當于5.4J/cm2，照射中每2min點一次0.1％核黃素溶液。保留上皮組直接點0.1％低滲核黃素溶液，至角膜厚度大于400μm時開始照射。
　　 2.角膜生物力學測試
　　 角膜膠原交聯術后立即處死兔子，取中央10mm×3mm的長條角膜片，試件在INSTRON試驗機上實驗，將

4、角膜片垂直夾在上下兩端的夾具上，間隔8～10mm。角膜破壞試驗:角膜試件拉伸至斷裂破壞，根據得出的數據可計算出彈性模量及受測角膜試件所能承載的最大拉力，即最大應力。實驗以加載速度2mm/min逐漸增加應力，終止條件為試件被拉斷破壞，計算機自動輸出數據。
　　 3.角膜組織病理學觀察
　　 切取角膜中央部位組織，石蠟包埋，4μm切片，進行HE染色觀察角膜基質內膠原纖維形態(tài)變化情況等。
　　 4.角膜細胞的毒性作用<

5、br>　　 取出角膜后用石蠟包埋，做4μm切片，行TUNEL檢測。具體操作步驟依照說明書進行。結果判定:陽性反應為細胞核被染成棕黃色。計數5個隨機高倍視野的陽性細胞數，測得的數據以x±s表示。
　　 結果:
　　 1.點0.1％低滲核黃素溶液后，兩組兔眼角膜厚度均可增加達到400μm。
　　 2.經交聯治療后，去上皮組角膜試件的最大應力明顯高于保留上皮組和對照組(P＜0.05)，實驗組間差異無統計學意義（P＞0

6、.05）。彈性模量:E去上皮組＞E保留上皮組＞E對照組（P＜0.05）。
　　 3.經交聯治療后，兩組間角膜基質纖維未見明顯變化，細胞凋亡無統計學差異。
　　 結論:
　　 1.0.1％低滲核黃素溶液點眼，可顯著增加角膜厚度，去上皮與保留上皮均可使角膜厚度達到400μm以上的安全照射厚度。
　　 2.0.1％低滲核黃素溶液與長波紫外線A可誘導角膜膠原纖維交聯度的增加。
　　 3.低滲核黃素/紫外線