HS對MDA-MB-231內質網應激、肝素酶表達及凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　1、研究誘導內質網(endoplasmic reticulum, ER)應激對乳腺癌MDA-MB-231肝素酶(Heparanase，HPSE)表達和細胞凋亡的影響。
　　2、探討硫酸乙酰肝素（heparan sulfate,HS）對處于 ER應激乳腺癌 MDA-MB-231細胞葡萄糖調節(jié)蛋白78(glucose-regulated protein, GRP78)、HPSE表達及凋亡的影響。
　　3、研究S

2、iRNA敲減GRP78對HS治療乳腺癌細胞凋亡敏感性的影響。
　　方法：
　　1、提取MCF-7細胞匯合期培養(yǎng)液中的HS鏈；以濃度300、600、900、1200μg/mL的HS處理乳腺癌MDA-MB-231細胞24、36、72h后采用MTT比色法，檢測增殖抑制率。
　　2、以乳腺癌細胞MDA-MB-231為研究對象，用不同處理因素（無血清、低糖、低氧、化療藥物）不同時間（0、3、6、12、24 h）處理細胞，West

3、ern blotting檢測GRP78和HPSE的表達；同上處理,溴化丙啶（propidium iodide, PI）染色流式細胞儀（FCM）檢測細胞凋亡率。
　　3、分別用HS、衣霉素（Tunicamycin, TM）和HS+TM不同時間（0、6、12、24、36和48h）處理細胞，Western blotting檢測GRP78和HPSE的表達；同上處理細胞，通過流式細胞儀檢測細胞凋亡率。
　　4、分別用HS、TM和HS+

4、TM處理細胞48h，用RT-PCR法檢測GRP78mRNA和HPSEmRNA的表達。
　　5、SiRNA轉染敲減GRP78的表達，檢測HS誘導凋亡率的改變。
　　結果：
　　一、HS對乳腺癌MDA-MA-231細胞的增殖抑制作用。
　　MTT法顯示結果為不同濃度的HS均能抑制乳腺癌細胞的增殖，與對照組比較有顯著差異（P﹤0.05），且隨著HS濃度的增加抑制率隨之增大，隨著作用時間的延長抑制率也隨之增加；大劑量組H

5、S1200μg/ml時對細胞的抑制作用最強，作用72h后，最大抑制率為65.59％。
　　二、誘導ER應激對乳腺癌MDA-MB-231細胞HPSE表達和細胞凋亡的影響
　　1、無血清、低糖、低氧、順鉑均可誘導乳腺癌MDA-MB-231細胞內質網應激上調GRP78和HPSE的表達（P<0.01）；同時PI染色流式細胞儀檢測細胞凋亡率，顯示四種處理因素誘導細胞凋亡均不敏感。
　　2、給予經典的ER stress誘導劑TM同

6、樣可以上調GRP78和HPSE蛋白表達及mRNA表達，與對照組相比有顯著差異（P<0.01)。PI染色后流式細胞儀進行分析， MDA-MB-231細胞凋亡率在48h時達最高為22.62%,與對照組0h相比,36h、48h差異具有顯著性（P<0.01)。
　　三、HS對乳腺癌MDA-MB-231細胞GRP78、HPSE表達及凋亡的影響
　　1、HS可以下調GRP78和HPSE蛋白表達，尤其在36和48h時下調的最為顯著（P<0

7、.01)。PI染色后流式細胞儀進行分析， MDA-MB-231細胞凋亡率在48h時達最高約30%,與對照組0h相比,36h、48h差異具有顯著性（P<0.01)。
　　2、HS可降低TM誘導的GRP78和HPSE蛋白表達及mRNA表達，不同作用時間組GRP78和HPSE表達與對照組比較無顯著差異（P<0.01)。
　　3、HS增加TM誘導細胞凋亡率，與對照組比較，有顯著差異（P<0.01)。
　　4、HS能將GRP78

8、 SiRNA轉染細胞的凋亡率提升到70%以上，與對照組比較，有顯著差異（P<0.01)。
　　結論：
　　1、HS對乳腺癌MDA-MB-231細胞增殖具有抑制作用，且這一作用呈現(xiàn)出濃度和時間依賴性。
　　2、當腫瘤細胞發(fā)生內質網應激時，HPSE的表達像GRP78一樣發(fā)生上調。HPSE表達的上調提示HPSE可能參與了內質網應激時腫瘤細胞適應性保護機制的構建，它可能構成腫瘤細胞對凋亡的耐受的原因之一。
　　3、HS對