槐耳通過上調(diào)肺癌細胞miR-26b-5p的表達抑制細胞增殖,促進細胞凋亡.pdf

1、目的:從microRNA水平探討槐耳清膏抑制肺腺癌細胞增殖，促進細胞凋亡的抗腫瘤分子機制。
　　方法:1.利用CFSE染色法和Annexin V-FITC/PI雙染驗證槐耳的抗腫瘤作用;2.利用基因芯片分析槐耳清膏處理前后肺癌細胞A549 miRNA表達譜的變化;3.利用熒光定量PCR技術(shù)檢測部分miRNA的變化，來驗證芯片結(jié)果的準(zhǔn)確性，并檢測幾種肺癌細胞系中miRNA的表達情況;4.目標(biāo)miRNA的mimic或inhibitor

2、轉(zhuǎn)染A549細胞或槐耳作用后的A549細胞，檢測A549細胞增殖、凋亡情況;5.利用生物信息學(xué)技術(shù)預(yù)測miR-26b-5p的靶基因，并用報告基因技術(shù)驗證miRNA的靶基因;6.利用基因干擾技術(shù)敲低miRNA的靶基因，并檢測靶基因敲低后，A549細胞增殖、凋亡情況;7.利用western blot檢測槐耳作用、miRNAmimic或inhibitor轉(zhuǎn)染后，A549細胞中miRNA靶基因及下游基因的蛋白表達情況。
　　結(jié)果:1.槐耳

3、能抑制A549細胞增殖，促進細胞凋亡，并且這種作用具有時間和藥物濃度依賴性;2.槐耳清膏作用改變了A549細胞的miRNA表達譜，66種miRNA表達發(fā)生變化(fold change＞2)，其中上調(diào)和下調(diào)的miRNA各有33種;3.槐耳能上調(diào)A549細胞中miR-26b-5p的表達，qRT-PCR的結(jié)果與芯片結(jié)果一致，并且在幾種非小細胞肺癌細胞系中，miR-26b-5p均呈低表達;4.轉(zhuǎn)染了miR-26b-5p mimic的A549細胞

4、有明顯的抑制增殖，促進凋亡作用，而miR-26b-5p inhibitor的轉(zhuǎn)染能削弱槐耳對細胞增殖的抑制和凋亡的促進作用;5.生物信息學(xué)預(yù)測EZH2作為miR-26b-5p的靶基因之一，同時在幾種非小細胞肺癌細胞系中EZH2均呈高表達，報告基因技術(shù)證實EZH2是miR-26b-5p的靶基因;6.在A549細胞中，EZH2的下調(diào)能抑制細胞增殖，促進細胞凋亡;7.在槐耳處理或miR-26b-5p mimic轉(zhuǎn)染的A549細胞中，EZH2、