Survivin在腦膠質瘤中表達意義的研究.pdf

1、目的：腦膠質細胞瘤約占成人原發(fā)性顱內腫瘤的50-60％，是最常見的顱內惡性腫瘤。膠質瘤的治療，目前以手術治療為主，由于腫瘤呈浸潤性生長，與腦組織無明確分界，難以徹底切除，術后復發(fā)也幾乎是不可避免的。因此，深入研究膠質瘤的生物學行為以及其生長調控因子，對于術后患者輔助治療的選擇以及預后的精確估計都有很深刻也很實際的意義。本試驗從上述問題著手，了解凋亡抑制蛋白(IAP)Survivin在腦膠質瘤中表達情況，以此探討Survivin的表達與腫

2、瘤異質性之間的聯(lián)系，從而進一步提高腦質瘤的總體治療水平。 實驗方法 方法：(1)研究對象：選擇選取中國醫(yī)科大學第一臨床學院神經外科2003年1月至2004年12月間手術切除的人腦膠質瘤組織標本54例，根據WHO(1999年)關于人腦膠質瘤病理分類方法，采用S-P超敏(鼠、兔)試劑盒免疫組化方法染色，選取正常腦組織6例作為染色對照組。(2)石蠟切片及HE染色：手術切除標本常規(guī)，10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成4μm厚

3、切片。(3)免疫組化染色：石蠟切片常規(guī)二甲苯脫蠟，每張切片加1滴過氧化物酶阻斷劑阻斷內源性過氧化物酶的活性，室溫下孵育20分鐘。切片放入0.01mmol/L的枸櫞酸溶液中，微沸，室溫下自然冷卻。每張切片1滴非免疫動物血清，室溫下孵育20分鐘，甩去。加適當稀釋的Survivin第一抗體，4℃過夜。第二天每張切片加1滴生物素標記的第二抗體，室溫下孵育10分鐘。加1滴鏈親和素．過氧化酶溶液，室溫下孵育10分鐘。每張切片加2滴新鮮配置的CAB溶

4、液，顯微鏡下觀察5-10分鐘，蘇木素復染，中性樹脂封固切片。Survivin染色的半定量判斷標準，采用人工觀察的方法。采用自動圖像分析系統(tǒng)測定視野的光密度值。實驗數據采用SPSS10.0 forwindows軟件進行統(tǒng)計學處理。 實驗結果 染色的結果顯示所有的膠質瘤均顯示了不同程度的Survivin的表達，但在正常腦組織中Survivin的表達均為陰性。Survivin的表達程度在不同級別膠質瘤中顯示了明顯差別，Surv

5、ivin的表達程度隨腫瘤級別升高而升高，統(tǒng)計學顯示其分布差異顯著(p<0.01)。同時，不同級別膠質瘤Survivin蛋白表達的光密度值有明顯差別，組織級別越高，Survivin蛋白平均光密度值越大，隨組織學級別升高Survivin蛋白平均光密度值有明顯增加。惡性膠質瘤往往具有異質性，比較了腫瘤實質和其周邊Survivin染色蛋白染色的光密度值，二者差異顯著(P<0.001)。 結論 1、Survivin在正常腦組織中均