富血小板血漿對(duì)光老化人皮膚成纖維細(xì)胞體外增殖的影響.pdf

1、目的：探索人皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）體外分離及培養(yǎng)的方法，利用長(zhǎng)波紫外線（UVA）照射誘導(dǎo)，體外建立HDFs光老化模型，進(jìn)而觀察不同濃度的富血小板血漿（PRP）對(duì)光老化HDF增值的影響，探索較適宜的PRP作用濃度，為PRP在皮膚年輕化方向的臨床應(yīng)用，提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、利用組織塊法分離、培養(yǎng)HDFs，不同能量值的UVA照射處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的第三代HDFs，根據(jù)老化細(xì)胞比率選定較適宜照射能量值，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行

2、光老化誘導(dǎo)。老化相關(guān)β－半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色試劑盒[17-20]和流式細(xì)胞術(shù)[22]分別對(duì)照射組和未照射組細(xì)胞進(jìn)行老化染色及細(xì)胞周期的檢測(cè)來(lái)確定光老化細(xì)胞模型的成功建立。
　　2、采取二次離心法提取人血PRP，利用含不同濃度PRP的完全培養(yǎng)基對(duì)光老化的HDFs進(jìn)行分組培養(yǎng)，在加入PRP后的1d、3d、5d、7d，分別利用CCK-8試劑盒及酶標(biāo)儀測(cè)定各組老化HDFs的增殖情況。根據(jù)加入PRP濃度的不同，實(shí)驗(yàn)分為0％PR

3、P組、1%PRP組、5%PRP組、10%PRP組、15%PRP組。
　　結(jié)果：
　　1、組織塊貼壁后7-8d即可觀察到大量成纖維細(xì)胞自組織塊邊緣爬出，細(xì)胞傳至第三代時(shí)，即可見(jiàn)形態(tài)規(guī)則、分布均勻的成纖維細(xì)胞。
　　2、不同能量值的UVA照射成纖維細(xì)胞，均可使老化細(xì)胞數(shù)量增加，當(dāng)照射能量值達(dá)到20 J/cm2時(shí)，大量細(xì)胞出現(xiàn)凋亡。UVA15 J/cm2照射組，SA-β-gal染液及細(xì)胞核 DAPI熒光染液雙染細(xì)胞約占總細(xì)胞

4、數(shù)的77.65%；未照射組，雙染細(xì)胞約占10.24%，兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；流式結(jié)果提示，未照射組，G1期**細(xì)胞所占比例為（60.15±0.22）%，G2/M期*的細(xì)胞所占比例（17.90±0.32）%，15J/cm2UVA照射組，處于G1期**的細(xì)胞所占比例呈明顯增多,為（92.34±0.31）%，同時(shí)處于G2/M期*的細(xì)胞所占比例呈明顯下降，為（6.53±0.12）%。兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3、與0%PRP組相比，其余

5、各濃度組的OD值均增加。5%及10%PRP組OD值增幅較其余組更為明顯。
　　結(jié)論：
　　1、成纖維細(xì)胞老化比率與UVA照射強(qiáng)度程正相關(guān)，UVA能量值越大細(xì)胞老化比率越高，照射能量超過(guò)20 J/cm2時(shí)，大量細(xì)胞凋亡。
　　2、15 J/cm2的UVA為較適宜的輻照能量，經(jīng)其誘導(dǎo)可成功建立人皮膚成纖維細(xì)胞的光老化模型。
　　3、不同濃度的PRP對(duì)老化HDFs的增值均具有促進(jìn)作用，其中5%及10%濃度較為理想實(shí)驗(yàn)濃