HBV相關慢加急性肝衰竭患者T淋巴細胞和單核細胞功能障礙的研究.pdf

1、第一部分 HBV相關慢加急性肝衰竭患者外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞與傳統(tǒng)T細胞失衡的研究
　　目的：近年來，慢加急性肝衰竭（ACLF）患者免疫功能障礙，尤其是固有免疫功能障礙的病理生理作用得到了廣泛研究，然而在適應性免疫失調(diào)方面的研究仍較缺乏。本研究有三個目的：1）評定乙型病毒性肝炎（HBV）相關ACLF患者外周血CD3+T淋巴細胞的數(shù)目改變；2）探討外周血CD4+調(diào)節(jié)性T細胞（Tregs）與傳統(tǒng)T細胞（Tconv）之間的平衡問題，

2、并進一步分析Tregs亞群比例的變化；3）評估CD4+Tregs及其各亞群的免疫抑制能力。
　　方法：從2011年8月至2013年3月收集20例HBV相關ACLF患者入院后首次留取的外周血標本，同期納入10例膿毒血癥休克患者、20例慢性乙型病毒性肝炎（CHB）患者和20名健康志愿者作為對照組。應用流式細胞術，我們進行外周血CD3+T細胞及其亞群的絕對數(shù)量檢測、CD4+Tregs的表型染色（表面分子CD25和CD45RA）和CD4+

3、T細胞胞內(nèi)FoxP3和IL-17染色。最后，應用CFSE染色測定CD4+Tregs及其各亞群在體外對Tconv增殖的抑制能力。
　　結果：與健康對照組（HC）和 CHB組相比，HBV相關 ACLF組和膿毒血癥休克組患者外周血 CD3+ T及 CD3+CD4+ T和CD3+CD8+T細胞的數(shù)目均顯著減少，且兩組之間沒有明顯差異；其中，CD4+Tregs的數(shù)量沒有改變而Tconv的數(shù)目顯著減少，使得CD4+Tregs與Tconv的比例

4、明顯升高，且膿毒血癥休克組高于HBV相關ACLF組。此外，HBV相關ACLF組CD4+Tregs與Th17的比值高于HC組和CHB組。對Tregs進行亞群分析，我們發(fā)現(xiàn)HBV相關ACLF組Treg-Ⅱ and-Ⅲ亞群占CD4+T細胞的比例顯著高于對照組，但是Treg-Ⅰ與HC組相比無明顯差異。體外功能試驗顯示，HBV相關ACLF患者整群CD4+Tregs的體外抑制功能與HC和CHB組相比無明顯差異，但各亞群的抑制能力各不相同，Treg-

5、Ⅱ最強，Treg-Ⅰ次之，Treg-Ⅲ最弱。
　　結論：同膿毒血癥休克組類似，HBV相關ACLF患者外周血CD4+T淋巴細胞發(fā)生明顯耗竭，且以Tconv的耗竭為主；發(fā)揮免疫負調(diào)作用的CD4+Tregs與Tconv的平衡被打破，前者明顯占優(yōu)勢。正如膿毒血癥休克中報道，這種失衡很可能在HBV相關ACLF的適應性免疫功能障礙中發(fā)揮了重要的作用。
　　第二部分 HBV相關慢加急性肝衰竭患者外周血單核細胞吞噬功能障礙的研究
　　

6、目的：單核細胞功能障礙是慢加急性肝衰竭（ACLF）患者發(fā)生免疫功能紊亂的一個重要特征，主要表現(xiàn)為單核細胞表面人類白細胞DR抗原（HLA-DR）的表達下調(diào)，分泌促炎性細胞因子的水平下降、分泌抑炎性細胞因子的水平升高。本文旨在探討乙型肝炎病毒（HBV）相關 ACLF患者外周血單核細胞吞噬功能的變化和可能的機制及與臨床預后的相關性。
　　方法：自2011年9月至2013年1月收集15例HBV相關ACLF患者外周血標本，同期納入12例慢性

7、乙型病毒性肝炎（CHB）患者和20例健康志愿者（HC）作為對照組；同時，根據(jù)患者病情的轉(zhuǎn)歸將ACLF患者進一步分為好轉(zhuǎn)組（7例）和未好轉(zhuǎn)組（8例）。利用流式細胞術進行外周血單核細胞的表型染色，并進行了體外吞噬試驗檢測單核細胞的吞噬能力。
　　結果：與HC和CHB組相比，HBV相關ACLF患者外周血單核細胞吞噬beads的百分比[beads(+)％]顯著降低；beads-FITC的幾何平均熒光強度（GMFI）略低于HC組，但無統(tǒng)計學

8、差異。HBV相關ACLF組單核細胞表面程序性細胞死亡-1（PD-1）分子表達明顯高于HC和CHB組；加入PD-1阻斷抗體后，ACLF患者外周血整群單核細胞beads(+)%和GMFI均明顯回升。對單核細胞進行亞群分析發(fā)現(xiàn)，HBV相關ACLF患者CD14+CD16-(Mo1)亞群的beads(+)%顯著低于對照組；其中一群新的CD14lowCD16-單核亞群（Mo0）的beads(+)%明顯低于同組經(jīng)典的CD14highCD16-(Mo1

9、’)單核亞群和HC組、CHB組的經(jīng)典Mo1（CD14+CD16-）亞群。此外，我們發(fā)現(xiàn)HBV相關ACLF未好轉(zhuǎn)組外周血單核細胞的beads(+)%顯著低于好轉(zhuǎn)組。
　　結論：外周血單核細胞吞噬功能障礙是HBV相關ACLF患者免疫紊亂的一個重要特征，尤以新亞群Mo0和經(jīng)典Mo1’的吞噬能力障礙為主；PD-1阻斷后可以明顯逆轉(zhuǎn)單核細胞的吞噬功能障礙，因此抗PD-1抗體有望成為緩解HBV相關ACLF免疫抑制狀態(tài)的有效策略。單核細胞吞噬功