慢病毒介導hIL-24基因對瘢痕疙瘩成纖維細胞TGFβ1信號通路的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：本課題組前期實驗證實hIL-24可抑制瘢痕疙瘩侵襲性生長、促進其細胞凋亡，但其作用機理尚不清楚。本研究擬在前期工作基礎上，從信號轉導途徑初步探討hIL-24可能的作用機制，為臨床應用IL-24基因防治瘢痕疙瘩提供充足的理論基礎和實驗依據。
　　 方法：⑴合成引物，以含hIL-24的質粒為模板，PCR擴增出hIL-24基因，并重組到質粒GV208-GFP，酶切、測序鑒定正確后，將重組質粒GV208-hIL-24與包膜質粒pH

2、elper1.0及包裝質粒pHelper2.0共轉染到293T細胞，包裝出復制缺陷的慢病毒顆粒，進行病毒滴度的測定。⑵根據實驗需要，將瘢痕疙瘩成纖維細胞(Keloid fibroblast，KF)分為3組:KF組（空白對照組）、KF-LV組（轉染空載體慢病毒組）和KF-IL24組（轉染重組慢病毒LV-IL-24組）。分別采用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR法)和蛋白印跡(Western-blot)的方法檢測各組ERK1/2、p38及S

3、mad3的mRNA和蛋白的表達水平。
　　 結果：①通過采用PCR和測序鑒定，證實h IL-24基因已克隆到慢病毒連接載體GV208中;②收集的慢病毒顆粒感染293T細胞，病毒滴度達2.00E+8 TU/ml;③與KF組和KF-LV組相比,KF-IL24組中ERK1/2、Smad3的mRNA和蛋白的表達水平降低(P＜0.05)，同時p38的mRNA和蛋白的表達水平升高(P＜0.05)。
　　 結論：⑴成功構建的攜帶hIL

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