丁苯酞對STZ糖尿病大鼠認知功能障礙及CaMK Ⅱ表達的影響.pdf

1、目的:糖尿病會對中樞神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生損害，形成糖尿病腦病(diabetic encephalopathy)，臨床上表現(xiàn)為認知功能障礙。研究顯示海馬突觸可塑性的變化與糖尿病認知功能障礙有關。鈣/鈣調素依賴性蛋白激酶-Ⅱ（calcium/calmodulin-de pendprotein kinase-Ⅱ，CaMKⅡ）是調節(jié)學習記憶與突觸可塑性的重要蛋白因子。CaMKⅡ的含量間接反映了學習記憶的能力。本實驗旨在探討丁苯酞對鏈脲佐菌素(strep

2、tozotocin，STZ)糖尿病大鼠認知功能障礙以及CaMKⅡ的影響。
　　 方法:
　　 1、制備STZ糖尿病大鼠模型及分組:
　　 健康雄性(Sprague-Dawley，SD)大鼠55只（體重140-160g），隨機分為正常對照組(NC組，n=10只)，糖尿病組（n=45只），糖尿病組大鼠空腹過夜后一次性腹腔注射STZ60mg/kg，72h后于尾靜脈測隨機血糖，血糖≥16.7mmol/l視為造模成功。成模

3、后將糖尿病組大鼠隨機分為糖尿病對照組(DC，n=15)，糖尿病丁苯酞低劑量組（DL組，n=15），糖尿病丁苯酞高劑量組(DH組，n=15)。
　　 2、干預:
　　 動物成模后，給予NC組等量玉米胚芽油灌胃，給予DC組等量玉米胚芽油灌胃，給予DL組丁苯酞(60mg/kg)+等量玉米胚芽油灌胃給予，DH組丁苯酞(120mg/kg)+等量玉米胚芽油灌胃，每日1次，歷時12周。
　　 3、一般情況觀察:
　　

4、觀察并記錄大鼠精神狀態(tài)及進食、飲食、尿量等一般情況，檢測并記錄血糖、體重變化。
　　 4、行為學檢測:
　　 各組大鼠于成模12周后分別進行Morris水迷宮實驗，包括前5天的定位航行實驗以記錄逃避潛伏期及第6天的空間探索實驗以記錄60s內穿越平臺次數(shù)。
　　 5、制備標本及觀察指標:
　　 水迷宮實驗結束次日，處死大鼠，取海馬組織，行HE染色觀察海馬組織形態(tài)，行實時熒光定量-聚合酶鏈反應(R-TPCR)

5、檢測CaMKⅡmRNA水平以及免疫組織化學分析、蛋白免疫印跡法(Western-blot)檢測細胞CaMKⅡ蛋白表達。
　　 6、統(tǒng)計學分析:
　　 所得數(shù)據(jù)均應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包理，應用兩個獨立樣本的t檢驗、完全隨機設計的單因素方差分析、重復測量方差分析、秩和檢驗進行統(tǒng)計，應用均數(shù)±標準差表示結果，應用P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:
　　 1、一般情況觀察
　　 正常

6、對照組大鼠血糖正常、皮毛光亮、體重穩(wěn)定增長、反應靈敏等。糖尿病大鼠血糖明顯升高（＞20.0mmol/l），具備糖尿病的典型癥狀如多尿、多飲、多食等，逐漸出現(xiàn)皮毛枯黃、生長緩慢、體重下降、反應遲鈍等現(xiàn)象。干預過程中，丁苯酞高劑量組大鼠一般情況比丁苯酞低劑量組好。
　　 2、Morris水迷宮結果
　　 基礎游泳速度:各組大鼠游泳速度無統(tǒng)計學意義。
　　 位航行實驗:與正常對照組相比，糖尿病對照組逃避潛伏期延長(P＜

7、0.05)，提示成模后12周，糖尿病大鼠出現(xiàn)認知功能障礙;與糖尿病對照組相比，丁苯酞低劑量組、丁苯酞高劑量組逃避潛伏期縮短(P＜0.05);與丁苯酞低劑量組相比，丁苯酞高劑量組逃避潛伏期在第1天和第2天無顯著差異，第3天到第5天逃避潛伏期縮短(P＜0.05)，不同天數(shù)的潛伏期長短差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，第1天＞第2天＞第3天＞第4天＞第5天，天數(shù)和分組之間不存在交互作用。
　　 空間探索實驗:與正常對照組相比，糖尿病對

8、照組、丁苯酞低劑量組、丁苯酞高劑量組大鼠穿越平臺次數(shù)減少(P＜0.05);與糖尿病對照組相比，丁苯酞低劑量組、丁苯酞高劑量組大鼠穿越平臺的次數(shù)增加(P＜0.05);與丁苯酞低劑量組相比，丁苯酞高劑量組大鼠穿越平臺次數(shù)增加(P＜0.05)。
　　 3、海馬組織HE染色結果
　　 正常對照組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細胞形態(tài)正常，結構完整，排列整齊;糖尿病組細胞排列紊亂，胞體縮小，胞質紅色，正常形態(tài)神經(jīng)細胞數(shù)量明顯減少。丁苯酞低劑量組

9、和丁苯酞高劑量組細胞形態(tài)正常，排列較整齊，結構較為完整。
　　 4、免疫組化結果
　　 糖尿病對照組海馬CaMKⅡ蛋白表達量較正常對照組降低(P＜0.01);丁苯酞低劑量組和丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ表達量均比糖尿病對照組增高(P＜0.01);丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ表達量高于丁苯酞低劑量組(P＜0.01)。
　　 5、Rt-PCR結果
　　 糖尿病對照組海馬CaMKⅡ表達量較正常對照組降低(P＜0.0

10、5);丁苯酞低劑量組和丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ表達量均比糖尿病對照組增高(P＜0.01，P＜0.05);丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ表達量高于丁苯酞低劑量組(P＜0.01)。
　　 6、Western blot結果
　　 糖尿病對照組的CaMKⅡ蛋白表達量低于正常對照組(P＜0.01);丁苯酞低劑量組和丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ蛋白表達量與糖尿病對照組相比均增高(P＜0.01);丁苯酞高劑量組的CaMKⅡ蛋白表達量高于丁