人神經(jīng)干細胞移植修復大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、背景和目的： 脊髓損傷是一種嚴重危害人類健康的疾病，隨著交通和建筑事業(yè)的迅速發(fā)展，近年來脊髓損傷的發(fā)病率有上升趨勢。根據(jù)報道SCI患者在美國每年新增病例超過11000例，我國的年發(fā)生率約為60/100萬。脊髓損傷常導致?lián)p傷節(jié)段平面以下感覺、運動功能不同程度的喪失和大小便失禁，給病人自身帶來終生的生理、心理痛苦，嚴重降低了病人的生活質量，同時也給家庭和社會帶來沉重的負擔。 脊髓損傷的治療一直是神經(jīng)科學研究的難點和熱點，傳統(tǒng)

2、觀點認為中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，由于神經(jīng)元自身再生能力差和外在微環(huán)境的抑制，損傷神經(jīng)是不可再生的。直至1981年Aguayo等研究發(fā)現(xiàn)損傷后的中樞神經(jīng)軸突在合適的環(huán)境中可以再生。研究者以減輕或阻止繼發(fā)性損害和支持、誘導神經(jīng)再生兩大指導思想進行了大量脊髓損傷修復的研究，細胞移植是其中的一大研究熱點，自Reyonlds等于1992年在Science上首次報道從成年鼠紋狀體分離出神經(jīng)干細胞以來，神經(jīng)干細胞因具有獨特的生物學特性，使其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)

3、疾病的應用受到極大的關注。大量的研究證明，在脊髓損傷的修復治療中NSCs有著廣闊的應用前景。本實驗針對國內(nèi)外神經(jīng)干細胞移植治療脊髓損傷的前沿研究，通過將流產(chǎn)胎兒海馬區(qū)神經(jīng)干細胞移植到脊髓損傷大鼠對神經(jīng)干細胞在體內(nèi)的存活和分化，損傷部位髓鞘再生以及大鼠后肢運動功能恢復進行檢測，做了較系統(tǒng)的對照研究，為該領域進一步的基礎研究及臨床應用奠定理論和實驗基礎。研究方法： 取2-3個月流產(chǎn)胎兒海馬區(qū)組織培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，神經(jīng)巢蛋白(nesti

4、n)抗體進行細胞免疫染色鑒定神經(jīng)干細胞。移植前使用CM-DiI熒光染料標記神經(jīng)干細胞。NYU打擊器致大鼠T10脊髓損傷，傷后第8天對大鼠進行BBB評分后隨機分為移植組和對照組，傷后第9天進行細胞移植，通過組織冰凍切片免疫熒光化學檢測NSCs存活及其向神經(jīng)細胞分化情況，超微結構觀察軸突再生情況，BBB運動功能評分觀察大鼠后肢運動功能恢復情況，分析和評價人神經(jīng)干細胞異體移植對脊髓損傷的修復作用。 結果： 1.建立人神經(jīng)干細胞

5、體外培養(yǎng)體系，分離培養(yǎng)的細胞呈神經(jīng)球樣懸浮生長，經(jīng)鑒定為神經(jīng)干細胞，CM-DiI標記神經(jīng)干細胞，熒光強度合適，且不影響干細胞活性。 2.組織間接免疫熒光染色檢測到NeuN、CNPase、GFAP、MBP、Nestin陽性表達的細胞，激光共聚焦顯微鏡觀察提示hNSCs在成鼠損傷脊髓中可分化為神經(jīng)元、少突膠質細胞及星型膠質細胞；并且術后8周仍有部分NSCs保持未分化狀態(tài)。移植組穿越瘢痕區(qū)的再生軸突多于對照組、從傷后第4周起移植組BB