川芎嗪聯(lián)合丹參延緩大鼠慢性移植腎腎病的進(jìn)程.pdf

1、目的：探索川芎嗪聯(lián)合丹參對(duì)大鼠慢性移植腎腎?。–hroni callograft nephropathy，CAN）的治療作用，揭示其與CAN之間的關(guān)系，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)其延緩大鼠CAN的作用機(jī)制，為臨床上延長(zhǎng)移植腎的存活時(shí)間提供新的治療途徑。 方法： 1.大鼠模型的建立：F344近交系大鼠和Lewis近交系大鼠作為供、受體，取供體的左腎作為供腎，在裸眼直視下行供體下腔靜脈與受體腎靜脈的端端吻合，供體腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈行端側(cè)

2、吻合，進(jìn)行原位異體腎移植。 2.將125只腎移植大鼠分成5組，每組25只，分別為A組環(huán)孢素組，B組川芎嗪聯(lián)合環(huán)胞素組，C組丹參聯(lián)合環(huán)胞素組，D組川芎嗪、丹參聯(lián)合環(huán)胞素組，E組為空白組。給藥途徑：環(huán)孢素灌胃，丹參、川芎嗪腹腔注射。手術(shù)后連續(xù)用藥10天。期間觀察大鼠的生活狀態(tài)，分別于移植術(shù)后2，4，6，8，12周處死大鼠，通過(guò)檢測(cè)HE、PAS以及Masson染色觀察各組大鼠移植腎組織病理學(xué)變化。 3.采用免疫組織化學(xué)和實(shí)時(shí)熒

3、光定量PCR檢測(cè)TGF-β1的蛋白和mRNA在移植腎的表達(dá)及其定位情況，揭示川芎嗪聯(lián)合丹參延緩大鼠CAN的作用及機(jī)制。 結(jié)果 1.大鼠CAN模型的建立通過(guò)手術(shù)訓(xùn)練技術(shù)成熟后共進(jìn)行140例手術(shù)，手術(shù)成功率96.43％；手術(shù)總時(shí)間約150min，其中取腎約20min，進(jìn)行移植術(shù)約70min。通過(guò)對(duì)移植腎病理學(xué)動(dòng)態(tài)檢查，移植腎術(shù)后4周開(kāi)始出現(xiàn)CAN的病理改變，12周可見(jiàn)典型慢性排斥反應(yīng)病變。從而建立大鼠CAN模型。 2

4、.腎移植術(shù)后移植腎組織病理學(xué)改變腎移植術(shù)后E組腎移植大鼠存活均未超過(guò)2周；A組4周最早出現(xiàn)CAN病理改變，并隨病程進(jìn)展移植腎病變逐漸加重，12周可見(jiàn)典型的CAN病變；而B(niǎo)、C組移植腎出現(xiàn)的時(shí)間較A組出現(xiàn)晚，D組出現(xiàn)時(shí)間最晚，且病變相對(duì)較輕。A組與其它各組相比移植腎病理變化Banff總分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），與D組間的差異更顯著（P<0.01）；B、C組之間Banff總分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 3.免疫組化

5、及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TGF-β1的蛋白和mRNA在移植腎的表達(dá)情況移植術(shù)后4周TGF-β1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)開(kāi)始增多，其中以A組增高最明顯，B、C組次之，D組最低；隨著移植術(shù)后時(shí)間的推移，各組TGF-β1的表達(dá)進(jìn)一步增強(qiáng)，12周時(shí)以A組表達(dá)增強(qiáng)明顯，D組最低。各組間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，A組與其余各組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中與D組間的差異更顯著（P<0.01）；B、C組之間相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 通過(guò)對(duì)移植術(shù)

6、后大鼠移植腎各組各時(shí)相實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TGF-β1mRNA的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，A組TGF-β1mRNA的表達(dá)較其余各組明顯增高（P<0.05），與D組相比差異具有顯著性（P<0.01）；B組和C組相比，TGF-β1mRNA表達(dá)的相對(duì)比值數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 結(jié)論： 1.F344大鼠和Lewis大鼠作為供、受體進(jìn)行原位異體腎移植，該方法手術(shù)操作簡(jiǎn)單、直觀，簡(jiǎn)化了顯微外科技術(shù)的設(shè)備要求，建立了大鼠原位異體腎移植模型