降纖酶制備工藝及質量標準的研究.pdf

1、本文以中國長白山白眉蝮蛇蛇毒為原料，根據蛇毒的生物學特征，采用不同方法對蛇毒的真?zhèn)芜M行鑒別，并對降纖酶分離純化的生產工藝以及質量標準進行了研究。 采用三種不同介質sourse15Q，sourse15S，sourse30S進行離子交換色譜分離，能有效除去雜蛋白，保留活性組分。其中Sourse30具有低壓系統分辨率很高、成本低的特點。用Heparin-sepharoseCL-4B，Heparin-sepharoseCL-6B，Hep

2、arinsepharose6FastFlow三種親和介質分離，得到的色譜圖譜基本一致，為一個峰，對降纖酶的分離能力無差別，考慮到生產中的成本，選用價格比較低的Heparin-SepharoseCL-6B。將得到降纖酶粗品，采用Sourse15PHE，Sourse15ETH，Sourse15IS0三種介質進行疏水分離，各得到兩個峰?；钚詸z測表明，第二個峰為活性峰，Sourse15PHE活性組分的活性比另外兩種介質得到的活性組分高。在此基礎

3、上采用凝膠介質Superdex200，Superdex30，Superdex75分離，得到分離峰相似，都是一個具有活性的洗脫峰。其中Superdex75具有低非特異性吸附，提高回收率，分辨率、選擇性高。 經過介質篩選和工藝參數的小試研究，對工藝生產進行放大。最終經過離子交換，親和色譜，經過濾除菌，疏水色譜分離，再超濾，凝膠色譜分離。得到的活性峰，經高效液相色譜分析，其純度達99.0％以上，SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳顯示為一條單成

4、份帶，分子量為36500。該分離純化方法經過實際生產應用，具有工藝過程簡單，在生產過程中除去了神經毒、出血毒及其它有害毒素，與國內同類產品比較，具有降纖酶純度高，副作用小，產品質量穩(wěn)定等優(yōu)點。 參照2000年中國藥典，對降纖酶理化性質進行分析與檢測，并進行穩(wěn)定性考察。經觀察和檢測，在36個月內穩(wěn)定，本品的有效期定為2年。為此，建立本產品的質量控制指標。與目前臨床使用的t-PA，尿激酶，鏈激酶等溶栓制劑相比，蛇毒纖溶酶有其優(yōu)點，可