膽囊癌組織中基因組總甲基化、Bcl-2和P53基因甲基化狀態(tài).pdf

1、目的:
　　膽囊癌是一種相對少見的惡性腫瘤,其發(fā)病率與環(huán)境因素和遺傳因素均相關。膽囊癌惡性程度較高,預后較差,一般發(fā)現時患者已處于膽囊癌進展期。目前大多數研究的焦點是原癌基因(K-ras)和腫瘤抑制基因TSGs(Tumor Suppress Genes)如(TP53, P16,INK4A,和FHIT基因)。通過全基因組掃描和基因組等位基因分析發(fā)現在膽囊中多個等位基因位點缺失和突變,提示TSGs參與GBC的病理生理過程。近來,通過對

2、10個膽囊癌標本的全基因組芯片掃描22,000個轉錄位點分析發(fā)現一系列在以前未發(fā)現的TSGs。近年來,有關 DNA甲基化在腫瘤發(fā)病中的作用進行了大量研究,通過DNA甲基化導致TSGs表達抑制是腫瘤發(fā)生的主要機制之一。不同類型的腫瘤的其DNA甲基化改變具有一定的特異性。在許多病例中,異常的DNA甲基化與基因表達下降相關。DNA通過甲基化是基因缺失和基因突變之后又一表達抑制機制之一。通過數個臨床研究發(fā)現,DNA甲基化在腫瘤早期發(fā)現、預防、預

3、后評估和腫瘤腫瘤治療中具有重要作用。目前普遍認為膽囊癌與慢性膽囊炎相關,在所有的膽囊癌標本中均可見到炎癥反應。目前有關膽囊癌發(fā)生的分子機制還不清楚,有關DNA甲基化修飾在膽囊癌發(fā)生中的機制還不清楚。探討膽囊癌和膽囊炎患者之間基因組總甲基化水平、Bcl-2和p53基因的甲基化水平差異。
　　方法:
　　通過回顧性性分析收集在內蒙古自治區(qū)醫(yī)院就診的45例膽囊癌組織標本和40例膽囊炎組織病理學標本。進行患者基線資料采集,其中包括患

4、者性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤TNM分期、腫瘤標志物、腫瘤病理類型和手術方式等情況,提取組織中 DNA和 RNA,通過改進的酶聯免疫吸附技術檢測45例膽囊癌組織和40例膽囊炎組織基因組總甲基化水平,應用甲基化異性PCR技術檢測其 Bcl-2和p53基因甲基化水平,通過熒光定量PCR檢測標本中P53和Bcl-2基因的表達。
　　結果:
　　膽囊癌組織基因組總甲基化水平(4.87±1.1％)低于膽囊炎組織基因組總甲基化水平(6.2

5、78±0.91%),p<0.05;Bcl-2基因,45例GBC組織中,有8例發(fā)生甲基化(17.7%),40例CC組織中6例發(fā)生甲基化(17%),兩者之間無明顯差異(p>0.05)。p53基因,45例 GBC組織中29例發(fā)生甲基化(64%),40例CC組織7例發(fā)生甲基化(17.5%),兩者之間差異有統計學意義(p<0.05)。
　　GBC組織Bcl-2基因mRNA表達水平為0.66±0.16,CC組織Bcl-2基因mRNA表達水平為

6、0.33±0.14,兩者差異無統計學意義(p<0.05)。GBC組織p53基因 mRNA表達水平為0.55±0.17,CC組織p53基因mRNA表達水平為0.90±0.10,兩者差異有統計學意義(p<0.05)。
　　結論:
　　本研究發(fā)現,GBC發(fā)生過程中,與CC相比,基因組總甲基化水平降低,Bcl-2基因甲基化狀態(tài)無明顯變化,而P53基因甲基化水平升高。基因組低甲基化和 p53高甲基化可能是膽囊癌發(fā)生的分子機制之一?？傊?/p>