負載凋亡的肺腺癌細胞致樹突狀細胞成熟并增強自然殺傷細胞的細胞毒作用研究.pdf

1、本文研究目的：采用凋亡(1.33μmol/L順鉑所致)以及(熱休克、反復凍融和5.32μmol/L順鉑所致)壞死的肺腺癌A549細胞作為腫瘤相關抗原(tumor associated antigen，TAA)，分別刺激人外周血單核細胞來源的DC(monocyte-derived DC，mo-DC)；通過比較凋亡和壞死的A549細胞對mo-DC表型、超微結構和白介素(interleukin，IL)-12分泌量的影響，來評估二者對誘導mo-

2、DC成熟能力的影響，同時觀察凋亡的肺腺癌A549細胞所誘導成熟的mo-DC(A-DC)對NK細胞殺傷能力的影響。 研究材料與方法： 體外誘導DC，并用不同實驗條件下所得的TAA負載于DC；流式細胞術測定DC表面標志，電鏡觀察DC形態(tài)和超微結構，ELISA法測定IL-12分泌量；流式細胞術和Hoechst染色判定A549細胞凋亡；4h-<'51>Cr釋放法測定A-DC對CD56+NK細胞殺傷K562細胞能力的影響。：

3、 研究結果： (1)順鉑濃度為1.33μmol/L時，A549細胞凋亡率可達19.7％，細胞大多被阻滯在G1期；順鉑濃度為5.44μmol/L時，A549細胞幾乎全部死亡。 (2)掃描電鏡下可見DC伸展出大量大小不一、扁平的胞質突起，其末端圓鈍且細胞膜光滑無皺折。成熟的DC(mature DC，mDC)于不成熟的DC(immature DC，iDC)，但表面突起較iDC減少。 (3)透射電鏡下可見DC的胞體周圍

4、有不規(guī)則突起和褶皺；胞核染色深，偏向一側，形狀不規(guī)則，多為分葉狀，內異染色質沿核邊高度凝聚；胞質線粒體較為豐富，較多吞飲大泡及小泡。mDC胞體周圍突起較iDC減少。 (4)人DC特異性表面標志CDla為68.7％。不同實驗條件(L-DC、H-DC、A-DC和N-DC)刺激下DC的表面標志HLA-DR分別為6.98％、34.12％、39.49％、19.13％，CDS0分別為11.2％、40.55％、54.33％、49.76％。A-

5、DC的表面標志HLA-DR顯著高于L-DC和N-DC的表達(P<0.01)，但與H-DC表達相近(P>0.05)；A-DC與N-DC表面均高表達CD80，雖然前者略高于后者，但二者間無顯著性差異(P>0.05)。 (5)DC和L-DC僅能分泌少量IL-12，其細胞上清液濃度低于20 pg·ml<'-><'；1>；H-DC、N-DC和A-DC分泌IL-12的能力增強，其細胞上清液濃度分別為(201.5±30.3)、(41.2±5.

6、9)和(289.7±45.2)Pg·ml<'-1>。N-DC的IL-12分泌量較DC和L-DC有增加，H-DC和A-DC的IL-12分泌量均明顯增加，與其余各組間有顯著性差異(P<0.01)，其中尤以A-DC的IL-12分泌量最高，與H-DC間差異顯著(P<0.05)。 (6)與NK細胞對K562的裂解能力比較，DC和A-DC均能使NK細胞對K562的殺傷能力增強，而且差異顯著(P<0.01)：在DC作用下，當效靶比(effec

7、tor：target，E：T)為5、10和20時，NK細胞對K562細胞的裂解率分別為(3.7±0.96)％、(18.33±2.29)％和(46.8±3.39)％；在A-DC作用下，E：T為5、10和20時，NK細胞對K562細胞的殺傷能力進一步增加，其裂解率分別為(13.33±0.76)％、(33.67±1.19)％和(55.87±2.50)％。 (7)當A-DC的上清液加入NK細胞時，NK細胞對K562細胞的殺傷能力顯著增加

8、，如E：T為20時，K562細胞裂解率為(45.73±0.06)％，而未加A-DC時K562細胞裂解率(10.7±0.529)％(P<0.01)。 (8)當E：T為20時，NK細胞對K562細胞的裂解率是(47.1±0.96)％；加入干擾素(interferon，IFN)<,-γ>后，NK細胞對K562細胞的裂解率是(46.9±4.85)％，與NK細胞對照組無顯著差異(P>0.05)；加入IL-12后，NK細胞對K562細胞的裂

9、解率是(61.1±1.57)％，與另外二組差異顯著(P<0.01)。 (9)當E：T為20時，NK細胞對K562細胞的裂解率是(19.2±0.82)％；加入A-DCsup后，NK細胞對K562細胞的裂解率是(48.9±3.84)％，與NK細胞對照組差異顯著(P<0.01)。加入IFN-γab后，A-DCsup作用下的NK細胞對K562細胞的裂解率是(45.3±1.31)％，與A-DCsup組無顯著差異(P>0.05)；加入IL-