扇貝裙邊糖胺聚糖對6-OHDA誘導SH-SY57細胞氧化應激與凋亡的保護機制研究.pdf

1、目的:研究扇貝裙邊糖胺聚糖(SS-GAG)對6-羥基多巴胺(6-OHDA)誘導的人神經(jīng)母瘤細胞株SH-SY5Y丙二醛(MDA)含量、乳酸脫氫酶(LDH)活性、早期凋亡率以及凋亡相關基因Bax、Bcl-2與蛋白Cyt C、Caspase-9表達的影響，探討SS-GAG保護多巴胺能神經(jīng)元的作用機制。
　　方法:體外培養(yǎng)SH-SY5Y細胞，隨機分為對照組、6-OHDA損傷組和6-OHDA+SS-GAG(200、400和800μg/ml)

2、處理組。測定細胞中MDA含量和LDH活性，AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式細胞術檢測細胞凋亡，實時熒光(real-time) PCR檢測細胞Bcl-2、Bax mRNA表達的變化，蛋白質免疫印跡法(Western blotting)檢測胞質內細胞色素C(CytC)的蛋白釋放量，流式細胞技術(FCM)檢測活化Cappase-9蛋白表達量。
　　結果:與對照組相比，6-OHDA損傷組的MDA含量增加，LDH活性增高，早期凋亡率

3、升高，Bcl-2 mRNA表達降低，Bax mRNA表達升高，胞質內Cyt C釋放量增多，表達活化Caspase-9蛋白的細胞數(shù)增加，各項指標均存在顯著差異(P＜0.01)，損傷效果明顯。加入SS-GAG后，與6-OHDA損傷組比較，SH-SY5Y細胞中MDA含量減少，LDH活性降低，細胞早期凋亡率降低，Bcl-2 mRNA表達升高，Bax mRNA表達降低，胞質內Cyt C蛋白含量減少，活化的Caspase-9蛋白表達量減少。