歐李交替氧化酶基因(AOX2)的克隆及功能初步研究.pdf

1、干旱脅迫是最常見的自然災(zāi)害，能導致作物大量減產(chǎn)、土地荒漠化等一系列問題。培育新型耐旱植物是解決這些問題的有效途徑。歐李(Cerasus humilis(Bge.)Sok.）具有非常強的耐旱性，同時具有很高的經(jīng)濟價值，這使得歐李成為旱地種植的熱門樹種。干旱脅迫下，植物通過ABA介導信號轉(zhuǎn)導調(diào)控基因表達，來應(yīng)對不良環(huán)境，其中，交替氧化酶(AOX)發(fā)揮重要作用。為了探究脅迫與歐李間的關(guān)系，我們分析了干旱和水楊酸處理后AOX和UCP兩家族的表達

2、情況。然后，運用分子生物學的方法成功構(gòu)建了兩原核表達載體和兩植物表達載體。主要結(jié)果如下：
　　1、干旱脅迫下，AOX家族和UCP家族成員的表達量整體上調(diào)，只有AOX1a和AOX2的變化不明顯，其中AOX2的表達量在整個處理過程中都處于最高水平;相反，水楊酸處理后，兩家族成員的表達普遍下調(diào)，僅UCP2例外，AOX2的表達量仍然處于最高水平。故推測AOX2基因是歐李響應(yīng)脅迫的關(guān)鍵基因。
　　2、歐李AOX2基因全長1559bp，

3、5'端非編碼區(qū)共185bp，3'端非編碼區(qū)共345bp，開放閱讀框1029bp，編碼342個氨基酸。歐李AOX2蛋白由多個α螺旋和多個無規(guī)卷曲相互交替構(gòu)成，包含兩個跨膜結(jié)構(gòu)域，保守區(qū)域多集中在C端，與擬南芥的AOX2蛋白的同源性為66.96％，高出22個物種的平均水平1.98％。
　　3、pGEX-4T-3-A在BL21(DE3)、DH5α中不穩(wěn)定表達，而在Rosetta(DE3)菌株中穩(wěn)定表達，可溶性融合蛋白的量遠遠小于沉淀中的