神經營養(yǎng)因子相關基因在骨髓基質細胞分化為神經元中的表達.pdf

1、目的： 體外誘導骨髓基質細胞分化為神經細胞，并觀察誘導分化前后神經營養(yǎng)因子及其受體相關基因的表達變化，以探索骨髓基質細胞誘導分化為神經細胞的可能機制。 方法： 體外培養(yǎng)經Percoll(1.073g/mL)分離獲得的大鼠骨髓基質細胞并傳代擴增，用二甲亞砜(DMSO)，丁羥回醚(BHA)誘導分化，采用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化，分化后細胞用神經絲蛋白抗體，膠質原性纖維酸性蛋白抗體作細胞免疫熒光檢測。采用半定量

2、RT-PCR檢測分化前和分化后2h，6h，12h，24h和48h神經生長因子(NGF)，腦源性神經因子(BDNF)，神經營養(yǎng)因子-3(NT-3)及其相應受體TrkA，TrkB，TrkC和神經營養(yǎng)因子低親和力受體p75NTR的表達變化。 結果： 1.骨髓基質細胞體外誘導分化后2h即出現(xiàn)形態(tài)學變化，表現(xiàn)為細胞胞體呈球形，突起增多，形態(tài)類似神經元。細胞免疫熒光檢測顯示著色的神經絲蛋白(NF)抗體標記的神經元細胞，GFAP不著色

3、。 2.在骨髓基質細胞分化前后都有NGF和BDNF持續(xù)表達，但分化后NGF逐漸降低，TrkA,TrkB在分化前細胞中不表達，在誘導分化開始后12h可以檢測到他們的表達，而NT-3，TrkC在分化前后都不表達。 3.p75NTR在誘導分化后6h開始出現(xiàn)表達，12后顯著降低并很快消失。 結論： 骨髓基質細胞在體外可以定向誘導為神經細胞，誘導分化前后神經營養(yǎng)因子(NT)及其Trk受體和p75受體的表達發(fā)生了顯著