不同糖濃度培養(yǎng)雪旺細胞NGF和CGT表達變化及Egb761干預后的變化.pdf

1、背景與目的
　　 雪旺細胞(Schwann Cell,SC)是周圍神經系統(tǒng)的膠質細胞,除了與周圍神經的發(fā)生、發(fā)育、形態(tài)、功能等方面密切相關外,在周圍神經損傷后的再生與修復過程中也起著非常重要的作用,SC還能分泌多種活性物質誘導、刺激和調控軸突的再生和髓鞘的形成。
　　 神經生長因子(nerve growth factor,NGF)是最早發(fā)現(xiàn)的細胞生長調節(jié)因子,也是迄今為止研究得最清楚的一個神經營養(yǎng)因子。NGF在神經元的發(fā)

2、育、軸突的生長、遞質的合成及細胞的凋亡等階段均起著重要的作用。當外周神經受損傷時,SC成為其主要來源。
　　 半乳糖神經酰胺轉移酶(Galactosylceramide transferase,CGT)是合成神經髓鞘主要成份半乳糖神經酰胺的限速酶,在髓鞘以及體外培養(yǎng)的SC中表達。CGT是微粒體酶,主要在神經、腦、腎臟中表達,它催化半乳糖轉移到神經酰胺而合成半乳糖神經酰胺(Galactosylceramide,GalC)。GalC

3、是髓鞘中最豐富的脂質之一,在中樞或周圍神經系統(tǒng)中,占髓鞘干重的20％,對髓鞘的結構和功能起重要作用,但其過度的表達可誘導SC的凋亡。
　　 銀杏葉提取物具有抗脂質過氧化,對缺血-缺氧性損傷、機械損傷的神經元具有保護作用,并且具有抑制細胞凋亡的作用。
　　 目前,國內對于髓鞘形成細胞SC的研究大多集中在組織工程方面的研究,而對于其本身分泌活性物質對于周圍神經的作用研究并不多見。不同濃度葡萄糖水平對SC所分泌的NGF及CGT

4、影響的研究頗少見及關于銀杏葉提取物在糖尿病周圍神經保護方面的作用研究報道較少,特別是低糖對SC分泌的活性物質的影響尚未見報道。本實驗的目的就是為了觀察不同的糖濃度對SC NGF mRNA、CGTmRNA的影響及銀杏葉提取物干預所設定的低糖及商糖組SC NGF mRNA、CCT mRNA表達的變化。
　　 材料與方法
　　 1實驗方法
　　 本實驗首先將所培養(yǎng)的雪旺細胞分別于10mmol/L、25mmol/L、50

5、mmol/L糖濃度下培養(yǎng),采用RT-PCR技術,分別于培養(yǎng)后72h對各組的NGF mRNA,CGT mRNA表達進行測定。之后,用銀杏葉提取物Egb761分別干預10mmol/L、50mmol/L糖濃度培養(yǎng)的SC,分別與未用Egb761干預的10mmol/L,50mmol/L糖濃度組進行比較,各組均培養(yǎng)72小時,采用RT-PCR技術,對各組的NGF及CGT基因表達進行測定。
　　 2統(tǒng)計學方法
　　 采用SPSS10.0

6、統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差((x)±s)表示。數(shù)據(jù)經檢驗符合正態(tài)分布、方差齊,兩組之間的比較用t檢驗,組間比較采用單因素方差分析(ANOVA),三組間的兩兩比較用LSD檢驗。以α=0.05為檢驗水準。
　　 結果：
　　 1 SC細胞于不同的糖濃度培養(yǎng)過程中的形態(tài)學觀察
　　 倒置顯微鏡下觀察25mM糖濃度下細胞形態(tài)呈長梭形或多個細胞呈多角形連接在一起,類似成纖維細胞,細胞核位于細胞中間,呈圓形,1

7、0mM及50mM糖濃度下細胞成類圓形,細胞核不明顯。
　　 2不同糖濃度培養(yǎng)SC NGFmRNA、CGTmRNA表達的變化
　　 經過掃描及統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn),高糖及低糖時雪旺細胞CGT mRNA表達明顯增高,而NGF mRNA表達降低,組間進行比較得出:高糖組、低糖組與正常糖濃度組比較差異均有統(tǒng)計學意義,P<0.05；低糖與高糖組比較差異無統(tǒng)計學意義,P>0.05。
　　 3 Egb761干預后NGF mRNA、CG

8、T mRNA表達的變化
　　 經過掃描及統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)Egb761干預的高糖組與低糖組分別與空白對照組進行比較,NGF mRNA的表達差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),CGTmRNA表達無統(tǒng)計學意義P>0.05。
　　 結論：
　　 1、本實驗于低糖及高糖濃度培養(yǎng)SC,與正常糖濃度相比NGF mRNA的表達減少,CGT mRNA的表達增加,且差異均具有統(tǒng)計學意義,提示高糖及低糖均可能導致周圍神經的損傷