連接蛋白Cx43在炎性痛大鼠脊髓背角的表達及甘珀酸的抗傷害作用.pdf

1、本研究分為二部分： 第一部分 大鼠佐劑性關節(jié)炎性痛模型的建立及其脊髓背角縫隙連接蛋白Cx43表達的變化 目的:研究連接蛋白43(Cx43)在佐劑性關節(jié)炎性痛大鼠脊髓背角的表達，以探討縫隙連接在炎性痛中的可能作用。 方法: 1、行為學研究：取成年雄性大鼠20只，隨機分為2組：CFA模型組和NS生理鹽水組，每組10只。CFA組在大鼠左后肢踝關節(jié)外側皮下注射完全弗氏佐劑(CFA)50μl。NS組在大鼠相同部位

2、皮下注射NS 50μl。在注射前1d和注射后2h、4h、8h、1d、3d、5d、7d、10d、14d連續(xù)測定大鼠雙側的熱縮足反射潛伏期(PWTL)和機械縮足反射閾值(PWMT)。 2、形態(tài)學研究：20只成年雄性大鼠隨機分為4組：NS對照組、C2h組、C3d組和C7d組，每組5只。分別在CFA．致炎后相應時間點取脊髓腰膨大行Cx43免疫組織化學染色分析，測定雙側脊髓背角積分光密度值(IOD)值。 結果: 1、行為學

3、研究結果：單側踝關節(jié)外側皮下注射CFA可以在致炎后2h～7d誘導出雙側的熱痛覺過敏和機械性異常痛，雖然以致炎同側較為顯著(P<0.01)，但是仍呈現(xiàn)明顯的鏡像現(xiàn)象(P<0.01或0.05)。 2、形態(tài)學研究：CFA致炎后，大鼠脊髓雙側Cx43的表達與對照組相比均顯著增加(P<0.01或0.05)，主要集中于Ⅰ～Ⅱ層和X層，其時程變化與行為學變化基本一致。 結論: 1、CFA誘導的佐劑性關節(jié)炎性痛模型具有明顯的繼發(fā)

4、性痛敏現(xiàn)象(包括域外痛和鏡像痛)。 2、佐劑性關節(jié)炎大鼠脊髓雙側背角Cx43表達顯著增加，提示星形膠質細胞縫隙連接可能參與佐劑性關節(jié)炎誘導的病理性疼痛過程。 第二部分 鞘內注射甘珀酸對佐劑性關節(jié)炎大鼠的抗傷害作用研究 目的:研究鞘內注射縫隙連接阻滯劑一甘珀酸(CBX)對佐劑性關節(jié)炎大鼠的抗傷害作用。 方法:所有大鼠均給予L4-5鞘內置管，5～7d后保留無肢體活動障礙者。 1、首先研究鞘內注射CB

5、X對正常大鼠雙側后爪熱縮足反射潛伏期(PWTL)的影響，確定其時效與量效關系。32只雄性大鼠隨機分為4組：NS對照組、CBX50組、CBX25組和CBX100組(每組8只)，分別鞘內注射NS 10μl和CBX 25μg、50μg、100μg。在給藥前0.5h和給藥后0.5h、1～8h(每整點)連續(xù)測定大鼠雙側PwTL。 2、行為學研究：成年雄性大鼠40只隨機平分為五組，建立佐劑性關節(jié)炎模型，隨機選擇一組在致炎前0．5h鞘內注射C

6、BX 100~g進行預處理，其余四組分別以NS10μl(NS對照)和CBX 25μg、50μg、10μg的劑量在致炎后0.5h、1d、3d、5d、7d、10d、14d鞘內注射，每次給藥后2h測定雙側PWTL，并連續(xù)觀測NS對照組、CBX100和CBX100μg預處理組PWTL在致炎第ld的變化。 3、形態(tài)學研究：15只雄性大鼠隨機分為3組，每組5只。NS對照組于大鼠左后肢踝關節(jié)外側皮下注射NS 50μl，其它組注射CFA 50μ

7、l；3d后NS對照組和CFA模型組鞘內注射NS 10μl，CBX處理組鞘內注射注射CBX 100μg(10μl)。給藥后2h，取脊髓腰膨大行c-Fos免疫組織化學染色分析并FLIN計數(shù)。 結果: 1、CBX可以可逆性、劑量依賴性地提高正常大鼠的輻射熱痛閾(P<0.05或0.01)。在給藥后1h大鼠PWTL痛閾就顯著增加，2h達到高峰，持續(xù)1-2h后逐漸消退。兩側無顯著差異。 2、CBX在炎性痛的不同階段都可以逆轉

8、外周CFA誘導的雙側熱痛覺過敏(P<0.05或0.01)。致炎前使用CBX預處理可以在致炎第1天延緩痛覺過敏的出現(xiàn)(P<0.01)。 3、單側踝關節(jié)外側皮下CFA致炎后第3天，大鼠腰段脊髓雙側背角c-Fos蛋白表達顯著增加，表現(xiàn)為致炎后FLI神經(jīng)元數(shù)量增加和體積增大。而給予甘珀酸處理，可以逆轉這種改變，與CFA組比較，差異具有顯著統(tǒng)計學意義(P<0.01)。 結論:作為縫隙連接阻滯劑的甘珀酸對大鼠佐劑性關節(jié)炎誘導的病理性