血管內皮生長因子可溶性受體(sflT-1)與子宮內膜異位癥血管形成機制的相關性研究.pdf

1、目的:
　　 通過測定sflt-1、VEGF在異位子宮內膜、在位子宮內膜及正常子宮內膜組織中的表達，并計算VEGF的活性指數(shù)(VEGF/sflt-1)，探討sflt-1對VEGF及血管形成的影響，了解血管生成抑制因子在EMs血管形成機制中的作用，為EMs的臨床診斷和抗血管治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 選擇2011年6月-2012年6月在河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院因子宮內膜異位癥行腹腔鏡手術治療的患者，術后病理

2、證實為EMS的48例患者，根據(jù)美國生育協(xié)會(R-AFs)分期標準，Ⅰ-Ⅱ期15例，Ⅲ-Ⅳ期33例，年齡20-48歲，其中取得異位病灶48份，在位內膜32份。同時同期選擇因卵巢良性腫瘤、宮頸病變、漿膜下肌瘤、輸卵管疾病等非內異癥原因接受子宮切除的患者以及接受宮腔鏡檢查的非EMS患者30例，年齡32-50歲，（增生期18例，分泌期12例）術后病理證實為正常的子宮內膜。兩組患者均月經(jīng)規(guī)律(28-32天)，未合并其它內外科疾病，術前6個月未接受

3、過激素類藥物治療，6個月內無妊娠及哺乳史，各組間年齡無統(tǒng)計學差異，所有入選病例均經(jīng)病理明確診斷。
　　 ①采用免疫組化S-P法分別測定子宮內膜異位癥患者異位內膜、在位內膜及正常子宮內膜中VEGF、sflt-1蛋白的表達，并用CD105進行標記對微血管密度(MVD)定量檢測，用Image-ProPlus6.0軟件對結果進行分析;②采用實時熒光定量PCR法測定上述各組VEGFmRNA、sFlt-1mRNA表達水平;采用比較閾值法（2

4、-△△ct法）對目的基因進行相對定量分析，并計算VEGF活性指數(shù)。
　　 結果:
　　 1、免疫組化結果顯示:
　　 ①VEGF和sflt-1主要表達于三組內膜的腺上皮細胞、間質細胞和血管內皮細胞的胞漿和胞膜上，腺上皮細胞表達強于間質細胞;CD105主要表達于血管內皮細胞的胞漿和胞膜上。
　　 ②VEGF在在位內膜的表達明顯高于對照組和異位內膜(P＜0.01);sflt-1在對照組的表達明顯高于在位內膜和

5、異位內膜(P＜0.01);MVD在異位內膜、在位內膜和對照組中依次增高，且兩兩比較有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 ③對照組中，VEGF的表達在分泌期明顯高于增生期（P＜0.01），而sflt-1的表達在分泌期卻明顯低于增生期(P＜0.01)，MVD沒有顯著的周期性變化;在位內膜組中，VEGF的表達沒有顯著周期性變化（P＞0.05），sflt-1在在位內膜分泌期明顯低于增生期(P＜0.01)，MVD在分泌期顯著高于增生期（P

6、＜0.05）。
　　 ④在相關性分析中，在位內膜組sflt-1與MVD呈負相關(r=-0.638，P＜0.05);異位內膜組sflt-1與MVD無明顯相關性(r=-0.152P＞0.05);對照組VEGF、sflt-1與MVD均無明顯相關性。
　　 2、實時熒光定量PCR結果顯示:
　　 ①VEGFmRNA、sflt-1mRNA實時定量PCR檢測各標準曲線的R2均達到0.99，說明線性相關度很高，且擴增效率均在9

7、0％以上，各溶解曲線呈單峰分布說明PCR產物無非特異性的擴增(Fig.4-6)，擴增曲線中出現(xiàn)峰值(Fig.7-9)，說明本實驗引物設計合理且底物中存在目的基因。
　　 ②sflt-1mRNA在對照組、在位內膜和異位內膜組的表達量分別為3.898±1.287、3.278±0.997和1.866±0.916，兩兩比較有統(tǒng)計學意義;VEGFmRNA在對照組、在位內膜和異位內膜組的表達量分別為1.961±1.130、2.773±0.8

8、54和1.109±0.715，兩兩比較有統(tǒng)計學意義;VEGF活性指數(shù)在對照組、在位內膜和異位內膜組數(shù)值分別為0.698±0.461、0.918±0.375和0.572±0.397，在位內膜的數(shù)值明顯高于異位內膜和對照組(P＜0.05)，異位內膜組高于對照組，但差別無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）（Table3）。
　　 ③在位內膜中，VEGFmRNA、sflt-1mRNA和VEGF活性指數(shù)都沒有周期性變化;對照組子宮內膜中，VEGF

9、mRNA在增生期和分泌期的表達量分別為1.425±0.800和2.766±1.096(P＜0.01)，VEGF活性指數(shù)在增生期和分泌期分別為0.350±0.215和0.905±0.377(P＜0.01)，而對照組中sflt-1mRNA在增生期和分泌期的表達分別為4.386±1.400和3.165±0.600，即增生期的表達明顯高于分泌期(P＜0.01)(Table4)。
　　 ④VEGFmRNA的表達量在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期分別為

10、1.447±0.749和0.956±0.655，Ⅰ-Ⅱ期的表達量明顯高于Ⅲ-Ⅳ期(P＜0.05);sflt-1mRNA在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期的表達量分別為2.517±0.952和1.570±0.740，Ⅰ-Ⅱ期表達明顯高于Ⅲ-Ⅳ期(P＜0.01)。VEGF活性指數(shù)在Ⅰ-Ⅱ期和Ⅲ-Ⅳ期的表達量分別為0.773±0.649和0.651±0.351，Ⅰ-Ⅱ期高于Ⅲ-Ⅳ期，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　 結論:
　　 1、