水稻抗稻瘟病相關基因的篩選及RNA沉默載體的構建.pdf

1、稻瘟病嚴重影響水稻產量和質量,是水稻生產中最重要的病害之一,我國稻瘟病在流行的年份,重病區(qū)一般減產10％-20％,嚴重的達40％-50％,局部田塊甚至顆粒無收。近年來,由于分子生物學和基因工程技術的快速發(fā)展,通過植物轉基因技術,結合常規(guī)育種可以選育優(yōu)良轉基因水稻新品種。
　　 本研究室在以前的研究中將來自水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)的hrf1基因利用根癌土壤桿菌介導的轉基因方

2、法將其導入粳稻品種R109得到了轉基因后代12-2。對已獲得的R109轉基因水稻在溫室和田間小區(qū)進行抗性鑒定,發(fā)現(xiàn)轉基因系對稻瘟病多個小種抗性明顯提高,是一種廣譜意義上的抗性。轉基因系和出發(fā)植株間表現(xiàn)出的這種差異為后續(xù)研究提出了一個新的課題——差異表達基因的克隆及其功能驗證。
　　 基因芯片(gene chip)是將大量的靶基因片段有序的、高密度的固定在玻璃、硅等載體上制作而成的。基因表達譜芯片是目前應用最廣泛的基因芯片。本研究

3、在先前研究的基礎上,借助水稻表達譜芯片進行高通量、大規(guī)模的分析、鑒定和篩選轉基因抗稻瘟病水稻與轉基因受體植株之間的差異表達基因,從中篩選到了92個差異表達顯著的基因,在這92個基因中,顯著上調的基因有70個,顯著下調的基因有22。我們從顯著上調的基因中選擇了23個作為候選基因,通過RT-PCR和Real time PCR驗證最終確定了7個基因作為我們的目標基因。
　　 針對通過芯片得到的差異表達基因,本文應用Gateway技術進