大鼠骨髓間充質干細胞exosome對自身心肌分化及抗凋亡實驗研究.pdf

1、目的：研究經5-氮雜胞苷（5-aza）誘導或低氧培養(yǎng)后，骨髓間充質干細胞（Bone marrow Mesenchymal stem cells，BM-MSCs）分泌的外泌體（exosome）對間充質干細胞向心肌細胞分化或抗凋亡能力的影響，并探討exosome發(fā)揮心肌保護作用的機制。
　　方法：取6周齡SD大鼠的脛骨及股骨分離骨髓間充質干細胞，用全骨髓差異貼壁法培養(yǎng)及純化MSCs，并取第6代MSCs用于實驗，分別提取正常培養(yǎng)的BM-

2、MSCs分泌的exosome（BM-MEX）、低氧培養(yǎng)的BM-MSCs分泌的exosome（hypoEX）及5-aza誘導的BM-MSCs分泌的exosome（5-azaEX）用于體外研究。體外實驗：（1）將BM-MEX和hypoEX分別加入到含血清的大鼠心肌細胞培養(yǎng)基中，置于5%低氧培養(yǎng)箱，72h后用利用流式細胞術檢測各組心肌細胞凋亡率；（2）將BM-MEX和5-azaEX分別加入到大鼠骨髓間充質干細胞培養(yǎng)基中，2周后通過免疫熒光染色

3、比較上述兩組細胞與心肌細胞的肌鈣蛋白T（cTnT）、結蛋白（Desmin）、α-肌動蛋白（α-actin）表達情況；通過熒光定量PCR檢測以上三組細胞的cTnT、Desmin、α-actin、GATA4及Nkx2.5的基因相對表達量。
　　結果：（1）hypoEX組與BM-MEX組及陽性對照組相比，心肌細胞凋亡率均明顯下降，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而BM-MEX組與陽性對照組相比，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。（2）

4、心肌細胞的α-actin、Desmin、cTnT、GATA-4、Nkx2.5基因表達量均遠遠高于5-azaEX組及BM-MEX組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；5-azaEX組細胞的上述5種基因表達量均稍高 BM-MEX組，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　結論：（1）低氧培養(yǎng)的BM-MSCs所分泌的exosome能在體外減少缺氧環(huán)境下心肌細胞的凋亡率；而未經低氧處理的則不能降低心肌細胞凋亡率。（2）5-aza誘導的BM