sfat-1真核表達載體構建及其轉基因細胞系建立.pdf

1、n-3多不飽和脂肪酸作為細胞構成的重要成分，一直以來受到人們的廣泛關注。研究表明，哺乳動物體內一定量的n-3多不飽和脂肪酸含量，可以起到預防心血管疾病、神經退行性疾病甚至癌癥的作用。但n-3多不飽和脂肪酸在大多數(shù)動物體內不能合成，只能從食物中補充。fat-1基因的發(fā)現(xiàn)改變了這一現(xiàn)狀，它可以將多不飽和脂肪酸從n-6形式轉化為n-3形式，并發(fā)揮功能。研究人員已經利用轉基因的方法制備了能夠表達fat-1基因的轉基因動物，如：小鼠、豬等，為研究

2、n-3多不飽和脂肪酸的功能提供了高效、準確的醫(yī)學、營養(yǎng)學動物模型。 隨著人們對n-3多不飽和脂肪酸認識的增加，對富含這一成分的食品需求也大大增加，fat-1基因在生產特殊農產品方面也具有十分大的潛力，亟待我們開發(fā)利用。本實驗采剛經密碼子優(yōu)化了的線蟲基因sfat-1，使用脂質體轉染的方法獲得轉sfat-1基因荷斯坦奶牛細胞，并將其應用到克隆研究中。實驗中通過PCR-酶切連接方法人工合成了sfat-1基因，并構建了基于真核表達載體p

3、CDNA3.1(+)的轉基因載體pCDNA3.1(+)-sfat-1-EGFP及陰性對照載體pCDNA3.1(+)-EGFP；利用陽離子脂質體轉染法，對自建8079TE細胞系進行轉基因操作，經過G418篩選獲得剛性轉基因細胞，經PCR、RT-PCR檢測證明外源基因已整合進入細胞基因組內。 作為階段性成果，本實驗構建的pcDNA3.1(+)-EGFP對照載體，為實驗室后來轉基因研究提供了良好的對照；建立的8079TE細胞系可以為多