成都地區(qū)部分人群軍團菌抗體調(diào)查及LpHSP60基因克隆與表達.pdf

1、本研究分兩部分，第一部分：對成都地區(qū)部分健康人群和肺科病人血清進行軍團菌抗體檢查，以了解成都地區(qū)不同人群軍團菌感染情況。第二部分：研究嗜肺軍團菌HSP60抗原基因的克隆與表達，為軍團菌病核酸疫苗的研究奠定基礎(chǔ)。 一、成都地區(qū)部分人群血清軍團菌抗體檢查 采用微量凝集試驗對393份健康人及肺科住院病人血清標本進行Lp1-8型及Lm型軍團菌抗體效價測定，以了解成都地區(qū)不同人群軍團菌感染情況。結(jié)果表明所測軍團菌各型均有陽性出現(xiàn)。

2、健康人群軍團菌抗體陽性率為31.60％(73/231)，肺科住院病人為35.80％(58/162)，兩者無顯著性差異(P＞0.05)。健康人Lp1型陽性率最高(17.31％)，其次為Lp6型(11.26％)，Lp8型最低(0.43％)。肺科患者中Lp1陽性率最高(12.35％)，其次為Lp6(5.56％)。肺科病人感染的主要菌型與健康人一致，也是以Lp1、6為主要型別。這說明成都地區(qū)普遍存在不同種型的軍團菌感染。本研究首次報道了成都地區(qū)

3、Lm的感染情況。 二、嗜肺軍團菌HSP60抗原基因的克隆與表達 以嗜肺軍團菌Lp1株基因組DNA為模板，通過PCR擴增獲得了嗜肺軍團菌的HSP60基因。將HSP60基因定向克隆入原核表達載體pUC18，構(gòu)建原核表達重組質(zhì)粒pUC18-HSP60，測序表明片段大小為1647bp，與GeneBank中嗜肺軍團菌HSP60基因的核苷酸序列一致性為98％，根據(jù)核酸序列推導的548個氨基酸序列，與GeneBank中嗜肺軍團菌HSP

4、60蛋白的一致性為99％。IPTG誘導重組質(zhì)粒pUC18-HSP60在原核系統(tǒng)中表達出60kD的蛋白。將重組質(zhì)粒pUC18-HSP60中的目的基因亞克隆入真核表達載體pcDNA3.1(+)，構(gòu)建真核表達重組質(zhì)粒pcDNA3.1-HSP60并轉(zhuǎn)染NIH3T3細胞，通過免疫熒光檢測HSP60基因在真核細胞中的表達。結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染了重組質(zhì)粒的NIH3T3細胞，其免疫熒光檢測呈陽性反應(yīng)，證實重組質(zhì)粒pcDNA3.1-HSP60能在NIH3T3中有